P38αMAPK在大鼠卵泡中的表達(dá)及功能研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行論述:
　　第一部分:P38αMAPK在雌性大鼠卵泡發(fā)育中的表達(dá)
　　目的：P38αMAPK信號(hào)通路在雌性生殖系統(tǒng)中起著重要的作用，然而在大鼠卵泡中的表達(dá)和功能還不是很清楚，本研究通過(guò)探索P38αMAPK在大鼠卵泡發(fā)育過(guò)程中是否表達(dá)，從而探究P38αMAPK在卵泡發(fā)育中的功能。
　　方法：隨機(jī)選取成年雄性SD大鼠和成年雌性大鼠，按照1:2的比例交配，繁殖新生大鼠，分別收集2d、4d、8d、12

2、d、16d、20d、30d的新生雌性大鼠的卵巢。通過(guò)免疫組化檢測(cè)P38αMAPK和p-P38αMAPK在不同年齡段卵巢中的表達(dá)情況；通過(guò)western-blot檢測(cè)P38αMAPK和p-P38αMAPK在不同年齡段大鼠卵巢中表達(dá)變化。
　　結(jié)果：P38αMAPK在卵泡細(xì)胞和顆粒細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)，在不同卵泡卵母細(xì)胞中， P38αMAPK表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，而p-P38αMAPK表達(dá)逐漸增強(qiáng)；在不同鼠齡的顆粒細(xì)胞中，P38αMAPK表達(dá)也相對(duì)

3、穩(wěn)定，而p-P38αMAPK表達(dá)呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化的趨勢(shì)，隨著卵泡的發(fā)育，在第12d、30d表達(dá)相對(duì)較少，而在第16d、20d表達(dá)相對(duì)較多；western-blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn) P38αMAPK在卵巢中的表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，而p-P38αMAPK表達(dá)是先增加隨后減少的趨勢(shì)，在16d、20d表達(dá)相對(duì)較多。
　　結(jié)論：P38αMAPK在大鼠卵泡發(fā)育中存在表達(dá)，且表達(dá)存在一定的時(shí)間效應(yīng),對(duì)卵泡發(fā)育可能有重要作用。
　　第二部分:探索P38αMAP

4、K在卵母細(xì)胞中的定位與功能
　　目的：探究P38αMAPK在大鼠卵母細(xì)胞中的定位及功能。
　　方法：體外培養(yǎng)大鼠卵母細(xì)胞，通過(guò)免疫熒光的方式分別檢測(cè)P38αMAPK，p-MK2，p-P38αMAPK在大鼠卵母細(xì)胞減數(shù)分裂不同時(shí)間段的表達(dá)定位情況；通過(guò)western-blot檢測(cè)卵母細(xì)胞減數(shù)分裂不同時(shí)間段 p-P38αMAPK表達(dá)量變化；用P38αMAPK特異性抑制劑SB203580共培養(yǎng)卵母細(xì)胞，觀(guān)察卵母細(xì)胞生發(fā)泡破裂率和成

5、熟率；western-blot檢測(cè) SB203580共培養(yǎng)卵母細(xì)胞3h和12h的p-P38αMAPK表達(dá)情況。
　　結(jié)果：發(fā)現(xiàn)P38αMAPK在大鼠卵母細(xì)胞GV期，分布于整個(gè)細(xì)胞包括細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，但主要集中于細(xì)胞核周?chē)?；在大鼠卵母?xì)胞MⅠ期，P38αMAPK在紡錘體區(qū)域分布相對(duì)較少。p-MK2在大鼠卵母細(xì)胞GV期定位細(xì)胞質(zhì)中，主要集中于細(xì)胞核周?chē)辉贛Ⅰ期p-MK2，主要集中在紡錘體和核周?chē)?。p-P38αMAPK在大鼠卵母細(xì)胞

6、減數(shù)分裂GV期定位于細(xì)胞質(zhì)，主要在細(xì)胞核周聚集，細(xì)胞核中未見(jiàn)表達(dá)；GVBD期，p-P38αMAPK均勻的分布于細(xì)胞質(zhì)中；MⅠ期，p-P38αMAPK主要分布于紡錘體周?chē)?；AⅠ-TⅠ期，p-P38αMAPK分布逐漸趨向兩極，圍繞著核分布；MⅡ期，p-P38αMAPK重新圍繞著紡錘體分布。Western-blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，p-P38αMAPK在GV期開(kāi)始有表達(dá)，在MⅠ和MⅡ期表達(dá)量最高；SB203580共培養(yǎng)卵母細(xì)胞3h和12h發(fā)現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)組

7、培養(yǎng)3h，GVBD發(fā)生率為58.8±0.6％，而對(duì)照組GVBD發(fā)生率為82.5±1.6%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)12h，MⅡ發(fā)生率為40.1±3.1%，而對(duì)照組為73.3±3.7%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；western-blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SB203580共培養(yǎng)3h和12h的大鼠卵母細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組p-P38αMAPK表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：P38αMAPK在大鼠卵母細(xì)胞