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1、第一部分高糖對(duì)培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞p38 MAPK信號(hào)系統(tǒng)表達(dá)的影響 目的:檢測(cè)高糖對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系p38MAPK信號(hào)系統(tǒng)表達(dá)的影響,從而探討 p38MAPK 信號(hào)系統(tǒng)在高糖誘導(dǎo)糖尿病視網(wǎng)膜血管病變中的作用。 方法:以人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)為研究對(duì)象,模擬糖尿病狀態(tài),以高濃度葡萄糖刺激HUVEC,采用RT-PCR、Western-blot 法檢測(cè)細(xì)胞中p38MAPK、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β<,2>和基
2、質(zhì)金屬蛋白酶活力和蛋白表達(dá)情況的變化,電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的變化。 結(jié)果:高濃度葡萄糖可使內(nèi)皮細(xì)胞中 p38MAPK、MMP-2和 TGFβ<,2>表達(dá)增加,超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞周期發(fā)生變化。 結(jié)論:高糖誘導(dǎo)糖尿病視網(wǎng)膜血管病變可能部分通過p38MAPK信號(hào)系統(tǒng)表達(dá)增強(qiáng)。 第二部分p38 MAPK信號(hào)系統(tǒng)在實(shí)驗(yàn)性糖尿病倉(cāng)鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)變化 目的:檢測(cè)p38 MAPK信號(hào)系統(tǒng)在實(shí)驗(yàn)性糖尿病倉(cāng)
3、鼠視網(wǎng)膜中表達(dá)的變化,從而探討p38 MAPK信號(hào)系統(tǒng)在糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy DR)發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制。 方法:用鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)誘導(dǎo)倉(cāng)鼠糖尿病模型,HE 染色觀察光鏡下視網(wǎng)膜的形態(tài)特征及變化,用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)正常對(duì)照組(非糖尿病動(dòng)物組)和糖尿病動(dòng)物模型組視網(wǎng)膜中 TGF-β<,2>的表達(dá),電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)的變化。血清學(xué)檢測(cè)倉(cāng)鼠血清甘油三酯(TG
4、)、總膽固醇(TC)和電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)胰島素水平等變化。提取視網(wǎng)膜中總RNA,半定量RT-PCR觀察視網(wǎng)膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ<,2>mRNA表達(dá)情況,Western-blot檢測(cè)糖尿病倉(cāng)鼠視網(wǎng)膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ<,2>蛋白情況。 結(jié)果:糖尿病倉(cāng)鼠不僅表現(xiàn)為高血糖,還表現(xiàn)為高 TG 血癥。糖尿病倉(cāng)鼠視網(wǎng)膜內(nèi)TGF-β<,2>表達(dá)呈陽性染色反應(yīng),視網(wǎng)膜超微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)膜盤結(jié)構(gòu)分層,數(shù)量稀少;
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