脂肪細(xì)胞因子在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)病機(jī)制中作用研究.pdf

1、第一部分脂聯(lián)素在2型糖尿病大鼠視網(wǎng)膜的變化 目的：復(fù)制2型DM動物模型,檢測脂聯(lián)素在2型DM大鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)情況,分析重組脂聯(lián)素對其表達(dá)影響,探討脂聯(lián)素在2型DR早期發(fā)生中的作用. 方法：予以雄性SD大鼠32只高脂肪飲食(脂肪熱能接近50﹪)24周,小劑量STZ(0.5﹪,20mg/kg)腹腔注射復(fù)制出2型DM模型；隨機(jī)選取2型DM大鼠12只,重組脂聯(lián)素注射6只,健康大鼠8只作為對照,SPF環(huán)境飼養(yǎng)26周；應(yīng)用Weste

2、rn蛋白印跡和RT-PCR檢測脂聯(lián)素蛋白及mRNA在正常大鼠和2型DM大鼠視網(wǎng)膜的變化. 結(jié)果：STZ注射 1 周后大鼠空腹血糖≥16.7mmol/L,胰島素抵抗指數(shù)明顯增高,符合2型DM成模標(biāo)準(zhǔn)；脂聯(lián)素在早期2型DM大鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)較正常組顯著較少(P<0.01),注射重組脂聯(lián)素可使視網(wǎng)膜表達(dá)較前者明顯回升(P<0.01). 結(jié)論：采用模擬人類膳食結(jié)構(gòu)的高脂肪飲食加小劑量STZ注射方法復(fù)制出的2型糖尿病大鼠模型,與臨床

3、2型DM病人發(fā)病的自然過程十分接近,是研究2型DM發(fā)病機(jī)制的理想模型；脂聯(lián)素在2型DM大鼠視網(wǎng)膜的含量減少提示可能與DR早期發(fā)生相關(guān),提高視網(wǎng)膜的局部含量可抑制視網(wǎng)膜局部的炎癥反應(yīng),延緩DR早期發(fā)生。 第二部分脂源性炎癥因子在2型大鼠糖尿病視網(wǎng)膜病變的作用機(jī)制 目的：研究脂源性炎癥因子TNF-α IL-6及IL-18在2型DM大鼠視網(wǎng)膜表達(dá)變化,分析這3種脂源性炎癥因子在DR早期發(fā)生中作用,并就其與脂聯(lián)素相互的影響關(guān)系進(jìn)

4、行分析,深入探討DR早期發(fā)生機(jī)制. 方法：高脂喂養(yǎng)組2型DM大鼠隨機(jī)分成2組,正常高脂喂養(yǎng)組(HF組)8只,重組脂聯(lián)素組(rHF組)6只,健康SD大鼠8只作為對照,SPF環(huán)境飼養(yǎng)28周；應(yīng)用免疫組織化學(xué)從蛋白水平定性檢測了TNF-α、IL-6及IL-18在2型DM大鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)變化；利用組織的原位雜交技術(shù)從mRNA水平定性分析其在2型DM大鼠視網(wǎng)膜的變化情況；應(yīng)用病理圖象分析系統(tǒng)對結(jié)果進(jìn)行定量分析. 結(jié)果：2型DM大鼠

5、視網(wǎng)膜的表達(dá)TNF-α蛋白和mRNA水平較正常組明顯增加,定量分析參數(shù)平均灰度、平均光密度、積分光密度及面密度均有顯著性差異(P<0.05,其中平均光密度P<0.01),與重組脂聯(lián)素組相比平均灰度、平均光密度、積分光密度3項(xiàng)參數(shù)間也有顯著性差異(p<0.05)；IL-6、IL-18蛋白和mRNA表達(dá)較正常組明顯升高,平均光密度、積分光密度及面密度等參數(shù)間有顯著性差異(P<0.05,平均灰度值P<0.01),與重組脂聯(lián)素組比較,IL-6的

6、平均光密度參數(shù)分析均有顯著性差異(P<0.05),而平均光密度、積分光密度參數(shù)在IL-18表達(dá)存在顯著性差異(P<0.05). 結(jié)論：脂源性炎癥因子TNF-α、IL-6及IL-18在早期2型DM大鼠視網(wǎng)膜的高表達(dá)與早期糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生有關(guān),推測其促進(jìn)視網(wǎng)膜局部炎癥反應(yīng),同時通過全身系統(tǒng)加重胰島素抵抗,參與早期DR發(fā)生；機(jī)體脂聯(lián)素濃度水平增加可不同程度降低這些脂源性炎癥因子的表達(dá),延緩或防止DR的早期發(fā)生. 第三部分脂

7、肪細(xì)胞因子對血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能影響 目的：研究脂聯(lián)素和TNF-α對血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO、NOS等功能影響,探討其在DM血管微血管病變發(fā)生中可能作用. 方法：應(yīng)用體外培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),檢測脂聯(lián)素對基礎(chǔ)狀態(tài)下和TNF-α損傷狀態(tài)下血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌:NO、NOS(包括iNOS和eNOS)影響,并以PI-3K抑制劑、NF-κB抑制劑作用組作為比較分析. 結(jié)果：HUVEC細(xì)胞在基礎(chǔ)狀態(tài)下,脂聯(lián)素組分

8、泌iNOS明顯降低、eNOS明顯升高,與正常對照組相比有顯著性差異(P<0.01)；PI-3K抑制組iNOS下降、eNOS升高,與兩組相比均有顯著性差異(P<0.01)rNF-α炎性損傷狀態(tài)下,HUVEC分泌NO、iNOS顯著升高,eNOS顯著降低,與對照組相比有顯著性差異(P<0.01)；NF-κB抑制組NO、iNOS顯著升高,與TNF-α組相比有顯著差異(P<0.01),而eNOS無明顯改變(P>0.05)；TNF-α+脂聯(lián)素組分泌

9、NO、iNOS顯著降低,eNOS顯著升高,與TNF-α組、NF-κB抑制組相比均有顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)論：脂聯(lián)素可促使基礎(chǔ)狀態(tài)下HUVEC細(xì)胞分泌大量eNOS,產(chǎn)生保護(hù)性NO,同時降低iNOS活性,抑制損傷性NO產(chǎn)生,改善血管內(nèi)皮功能,脂聯(lián)素可能部分通過PI-3K途徑發(fā)揮這種作用.TNF-α通過NF-κB途徑促使HUVEC分泌iNOS,促進(jìn)血管內(nèi)皮的炎癥反應(yīng),脂聯(lián)素可拮抗TNF-α誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng),減輕TNF-α對血管