2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景:
  Alzheimer病(Alzheimer's disease,AD)是一種病因不明的神經(jīng)系統(tǒng)退行性變疾病,組織病學(xué)表現(xiàn)為老年斑、神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles,NFT)等。隨著老化的進(jìn)展,AD的發(fā)病事逐漸升高。對其機(jī)制的研究一直在進(jìn)展,其中小膠質(zhì)細(xì)胞在AD發(fā)生發(fā)展中的作用一直是備受爭議的熱點。
  正常情況下,腦內(nèi)的小膠質(zhì)細(xì)胞主要通過吞噬淀粉樣纖維對淀粉樣蛋白(beta amy

2、loid,Aβ)引起的神經(jīng)元丟失起到保護(hù)作用?;罨男∧z質(zhì)細(xì)胞能清除神經(jīng)系統(tǒng)中的死亡細(xì)胞,并且分泌幫助神經(jīng)元存活的神經(jīng)營養(yǎng)因子,但在AD等神經(jīng)退變性疾病的微環(huán)境中,小膠質(zhì)細(xì)胞異常激活后就往往變得難以控制,表現(xiàn)出形態(tài)和功能的可塑性,最終轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞的原型,包括形態(tài)變化、產(chǎn)生多種免疫炎性和神經(jīng)毒性因子,對神經(jīng)細(xì)胞和其他膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生影響?;罨男∧z質(zhì)細(xì)胞已成為各種神經(jīng)元退行性變包括AD的重要病理標(biāo)志。本研究通過抑制激活的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞,探

3、討去除Aβ刺激后小膠質(zhì)細(xì)胞是否能持續(xù)介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。
  大量研究顯示Aβ淀粉樣蛋白能改變小膠質(zhì)細(xì)胞的活性,細(xì)胞膜受體及信號通路在這個過程中起到重要作用。不同的細(xì)胞膜受體,包括CD36、α6β1整合素、CD14、TLR2、P2X7受體,與Aβ結(jié)合,激活P38MAPK信號通路導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞的活化,上調(diào)炎癥因子IL-1β的產(chǎn)生,炎癥因子又可活化P38MAPK信號通路,造成惡性循環(huán)。
  雖然淀粉樣蛋白級聯(lián)假說是目前最廣為接受的AD

4、發(fā)病假說,越來越多的學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)即使使用AD疫苗減少小鼠腦中Aβ沉積含量,其神經(jīng)退行性變依然持續(xù)存在且不斷進(jìn)展惡化,使得人們開始從間接激活損傷的角度開始懷疑。因此探討激活的小膠質(zhì)細(xì)胞對神經(jīng)系統(tǒng)退行性交的影響顯得尤為重要。
  目的:
  觀察體外培養(yǎng)條件下人工合成的抗Aβ1-42抗體對用淀粉樣蛋白寡聚體激活的BV2細(xì)胞P38MAPK通路表達(dá)及IL-1β的作用。以探討抑制激活的小膠質(zhì)細(xì)胞對P38表達(dá)及炎癥反應(yīng)的影響,觀察在去除

5、Aβ1-42的刺激后信號通路活性及細(xì)胞炎癥因子IL-1β濃度變化。
  方法:
  培養(yǎng)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞;按William L.Klein(2002)方法制備Aβ1-42寡聚體(ADDLs)備用;倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化;使用ELISA試劑盒檢測細(xì)胞上清中細(xì)胞因子IL-1β水平;WESTERN BLOT檢測BV2細(xì)胞中總P38與磷酸化P38蛋白表達(dá)含量。
  結(jié)果:
  1、倒置顯微光鏡下觀察BV2細(xì)胞形態(tài)學(xué)

6、變化
  (1)空白對照組中BV2細(xì)胞形態(tài)未見明顯改變;
  (2)BV2細(xì)胞激活組培養(yǎng)液中加入2umol/l的ADDLs作用6小時后細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯改變,細(xì)胞皺縮變圓,突觸變短,細(xì)胞間隙變大;
  (3)待ADDLs作用6小時后加入抗Aβ1-42抗體中和,繼續(xù)作用6小時發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)依然在持續(xù)皺縮,但在相同時間點較激活組皺縮程度輕;。
  (4)繼續(xù)觀察激活組與抗體組12、18、24小時發(fā)現(xiàn),抗體組細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞

7、間隙改變在相同時間點較激活組輕,但較空白組細(xì)胞形態(tài)仍未見明顯改善,推測細(xì)胞損傷在持續(xù)進(jìn)行中。
  2、ELISA法測細(xì)胞上清IL-1β濃度
  (1)在空白對照組中,IL-1β濃度較低,不隨時間發(fā)生變化;
  (2)在激活組中,IL-1β濃度明顯高于對照組(P<0.05),IL-1β濃度隨時間先上升后下降;
  (3)在抗體組中,IL-1β濃度明顯高于對照組(P<0.05),IL-1β濃度隨時間先上升后下降;

8、r>  (4)激活組與抗體組IL-1β濃度無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),提示抗Aβ1-42抗體并不能阻止炎癥反應(yīng)組。
  3、WESTERN BLOT法檢測BV2細(xì)胞磷酸化P38與總P38表達(dá)
  (1)對照組中總P38蛋白與磷酸化P38蛋白表達(dá)隨時間無明顯變化;
  (2)在激活組中磷酸化P38灰度隨時間先增強(qiáng)下降,總P38蛋白的量與空白組無明顯變化(P>0.05);
  (3)在抗體組中磷酸化P38灰度明

9、顯低于激活組(P<0.05),高于空白組,且隨時間先上升后下降,總P38蛋白表達(dá)與對照組相同。
  結(jié)論:
  (1)淀粉樣蛋白寡聚體(ADDLs)可刺激BV2小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變:細(xì)胞皺縮變圓,突觸縮短或消失,細(xì)胞多形性逐漸消失;抗Aβ1-42抗體中和細(xì)胞組雖能減緩細(xì)胞形態(tài)變化的速度但無法阻止形態(tài)變化的繼續(xù);
  (2)激活組細(xì)胞上清中IL-1β濃度隨ADDLs作用時間的先上升后下降;抗體組IL-1β濃度隨時間先

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