IL-6對BV2小膠質(zhì)細(xì)胞系鐵代謝相關(guān)蛋白的影響及其調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、帕金森病(Parkinson's disease，PD)以靜止性震顫、肌強(qiáng)直、運動遲緩、姿勢反射障礙為主要癥狀。病理上表現(xiàn)為中腦黑質(zhì)致密帶(substantia nigra pars compact，SN pc)中多巴胺(dopamine，DA)能神經(jīng)元丟失，進(jìn)而導(dǎo)致紋狀體中DA含量下降。在可能引起PD發(fā)病的原因中，神經(jīng)炎癥越來越引起人們的關(guān)注。PD患者黑質(zhì)(substantia nigra，SN)中出現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，腦脊液中腫瘤壞

2、死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)、白細(xì)胞介素1β(interleukin-1β，IL-1β)和白細(xì)胞介素6(interleukin-6，IL-6)含量出現(xiàn)了上升。1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP)、6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)、魚藤酮、annonacin

3、都能引起PD動物模型SN區(qū)中小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。PD患者SN中炎癥發(fā)生時，激活的小膠質(zhì)細(xì)胞中鐵含量異常升高，并且激活的小膠質(zhì)細(xì)胞可以影響到SNpc鐵的聚集，此外本實驗室前期已證明TNF-α、IL-1β可以影響神經(jīng)元的鐵代謝。那么小膠質(zhì)細(xì)胞釋放的IL-6是否會影響其自身鐵代謝的變化？本實驗應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)、MTT、熒光定量PCR、免疫印跡等多項研究技術(shù)，觀察了鐵對BV2小膠質(zhì)細(xì)胞釋放的IL-6的影響以及IL-6對BV2小膠質(zhì)細(xì)、胞鐵代謝的影響。

4、結(jié)果如下:
　　1.100μmol/L枸櫞酸鐵銨(ferric ammonium citrate，F(xiàn)AC)處理BV2細(xì)胞12h后，BV2細(xì)胞中IL-6 mRNA上調(diào)了30％，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，n=6)。
　　2.選用30 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml IL-6處理BV2細(xì)胞24 h，結(jié)果顯示各組活性與對照組相比細(xì)胞的存活率沒有變化(P＞0.05，n=4)。30 ng/ml被選為

5、后繼實驗中所應(yīng)用濃度。
　　3.30 ng/ml IL-6處理BV2細(xì)胞24 h，BV2細(xì)胞中鐵調(diào)節(jié)蛋白1(iron regulatory protein1，IRP1)的蛋白表達(dá)水平上調(diào)，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，n=5)。
　　4.30 ng/ml IL-6處理BV2細(xì)胞24 h，BV2細(xì)胞中鐵轉(zhuǎn)出蛋白ferroportin1(FPN1)的蛋白表達(dá)水平下調(diào)，與對照組相比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，

6、n=5)。
　　5.30 ng/ml IL-6處理BV2細(xì)胞1h，BV2細(xì)胞中磷酸化的JNK絲裂原活化蛋白激酶類（c-Jun N-terminal kinase，JNK）水平顯著增加(P＜0.05，n=3)。
　　6.10μmol/L、20μ mol/L SP600125處理BV2細(xì)胞24 h，處理組與對照組相比細(xì)胞的存活率沒有變化(P＞0.05，n=4)。10μ mol/L被選為后繼實驗中所應(yīng)用濃度。
　　7.預(yù)先用

7、10μ mol/L JNK特異型抑制劑SP600125處理BV2細(xì)胞1h后，加入30ng/ml IL-6繼續(xù)作用24 h，可以抑制由IL-6引起的IRP1蛋白表達(dá)水平上調(diào)，與IL-6處理組相比差別有顯著性(P＜0.05，n=4)。
　　8.預(yù)先用10μ mol/L JNK特異型抑制劑SP600125處理BV2細(xì)胞1h后加入30ng/ml IL-6繼續(xù)作用24 h，可以抑制由IL-6引起的FPN1蛋白表達(dá)水平下調(diào)，與IL-6處理組相

8、比有統(tǒng)計意義(P＜0.05，n=4)。
　　上述結(jié)果表明，F(xiàn)AC可增加BV2小膠質(zhì)細(xì)胞IL-6 mRNA的表達(dá)。IL-6可以使BV2小膠質(zhì)細(xì)胞IRP1表達(dá)增加，F(xiàn)PN1表達(dá)降低。JNK抑制劑SP600125預(yù)處理可以阻斷IL-6所引起的IRP1與FPN1蛋白的表達(dá)變化。本實驗證實高鐵環(huán)境下，BV2小膠質(zhì)細(xì)胞合成IL-6增多，而IL-6可以調(diào)控BV2小膠質(zhì)細(xì)胞鐵代謝相關(guān)蛋白，該過程是通過JNK信號途徑實現(xiàn)的。本研究為PD炎癥發(fā)生與鐵