趨化因子受體CXCR2促進(jìn)腹主動(dòng)脈瘤發(fā)生的作用機(jī)制研究及血管生成素相關(guān)生長(zhǎng)因子在腹主動(dòng)脈瘤血漿中的變化.pdf

1、目的:
　　腹主動(dòng)脈瘤(AAA)是老齡化社會(huì)的常見(jiàn)病，發(fā)病隱匿，一旦破裂，死亡率達(dá)60～80％。炎癥、細(xì)胞外基質(zhì)降解、平滑肌細(xì)胞(SMC)凋亡及表型轉(zhuǎn)化、和氧化應(yīng)激等均是AAA發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)是腹主動(dòng)脈瘤(AAA)進(jìn)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，趨化因子受體CXCR2及配體對(duì)巨噬細(xì)胞在組織的浸潤(rùn)起重要調(diào)節(jié)作用。但在AAA進(jìn)展過(guò)程中，CXCR2如何調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，進(jìn)而降解細(xì)胞外基質(zhì)、引起氧化應(yīng)激，機(jī)制尚不清楚。因此，本實(shí)驗(yàn)采用CXCR

2、2特異性抑制劑SB265610抑制CXCR2表達(dá)，明確CXCR2對(duì)小鼠AAA形成的調(diào)節(jié)作用，闡明CXCR2促進(jìn)AAA進(jìn)展的具體分子機(jī)制。其次本實(shí)驗(yàn)收集AAA病人和正常人血漿，檢測(cè)血管生成素相關(guān)生長(zhǎng)因子并探討其與腹主動(dòng)脈瘤直徑之間的關(guān)系。
　　方法:
　　(1)通過(guò)對(duì)雄性缺陷小鼠(ApoE-/-)皮下埋植血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)緩釋泵(1，000 ng/min/kg)的方法，復(fù)制動(dòng)物AAA模型;(2)通過(guò)腹腔注射SB26561

3、0（2mg/kg·d）抑制 CXCR2，因此小鼠分成四組:Control，SB265610，AngⅡ，AngⅡ+SB265610。通過(guò)測(cè)量血管超聲、鼠尾監(jiān)測(cè)血壓及大體解剖觀察各組小鼠體內(nèi)動(dòng)脈大體形態(tài)及血壓變化;通過(guò)HE染色、Elastin染色和免疫組織化學(xué)染色法觀察各組小鼠組織結(jié)構(gòu)的變化和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);通過(guò)細(xì)胞流式技術(shù)分析各組小鼠組織和血中炎癥細(xì)胞的表達(dá);通過(guò)PCR分析各組小鼠動(dòng)脈壁內(nèi)炎癥因子表達(dá)水平;通過(guò)DHE染色確定主動(dòng)脈壁內(nèi)氧化應(yīng)

4、激的情況，通過(guò)免疫組織染色、Western Blot和明膠酶譜方法分析各組小鼠動(dòng)脈壁內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)及活性變化;(3)收集AAA病人及對(duì)照組血漿，通過(guò)ELISA方法檢測(cè)不同組血漿中AGF表達(dá)水平，并分析不同直徑腹主動(dòng)脈瘤血漿AGF之間的差異。
　　結(jié)果:
　　1.AngⅡ刺激誘導(dǎo)ApoE-/-小鼠建立成功誘導(dǎo)建立AAA動(dòng)物模型;
　　2.SB265610抑制CXCR2后顯著抑制AngⅡ誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠AA

5、A形成（發(fā)生率及直徑）;
　　3.CXCR2被抑制后抑制AngⅡ誘導(dǎo)的①動(dòng)脈壁內(nèi)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn);②基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)及活性;③氧化應(yīng)激;
　　4.腹主動(dòng)脈瘤患者的血漿AGF水平升高，且直徑較大的腹主動(dòng)脈瘤升高程度更明顯。
　　結(jié)論:
　　我們證明了CXCR2的激活可以促進(jìn)腹主動(dòng)脈瘤形成。其作用機(jī)制可能與血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，MMP表達(dá)和活性增加，氧化應(yīng)激激活相關(guān)。CXCR2抑制劑SB265610可以抑制