HOXA10調(diào)控圍著床期p-CAF表達(dá)機(jī)制的研究.pdf

1、Hoxa10是同源框基因家族中的一員，是生物發(fā)育的重要調(diào)控基因，在胚胎期子宮發(fā)育和胚胎著床中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。HOXA10通過調(diào)控一系列下游基因的轉(zhuǎn)錄，參與細(xì)胞的生長、增殖、分化、凋亡的調(diào)控。但是對其調(diào)節(jié)的胚胎種植相關(guān)下游靶基因知之甚少。
　　 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(chromatin immunoprecipitation assay，ChIP）是一種在體內(nèi)研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用的理想方法，廣泛應(yīng)用于高通量篩選轉(zhuǎn)錄因子的未知基

2、因靶點(diǎn)和研究反式作用因子在整個(gè)基因組上的分布情況,有助于揭示DNA-蛋白質(zhì)相互作用的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。我們利用染色質(zhì)免疫沉淀與分子克隆技術(shù)相結(jié)合的方法，鑒定出 HOXA10的新靶基因?yàn)閜/CAF。共激活因子p/CAF是表觀遺傳調(diào)節(jié)分子，這種分子在靶基因乙?；せ钷D(zhuǎn)錄和多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中扮演著重要的角色。通過定量RT-PCR和Western blot等分子生物學(xué)方法，我們利用體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)檢測了p/CAF表達(dá)，確認(rèn)了HOXA10對其調(diào)控的關(guān)系，并對其

3、他一些相關(guān)的功能進(jìn)行了研究。我們的研究結(jié)果如下：
　　 1．通過ChIP及CHIP－PCR方法，首次發(fā)現(xiàn)并驗(yàn)證了p/CAF是HOXA10的新靶基因；
　　 2．HOXA10通過結(jié)合p/CAF啟動(dòng)子中的順式作用元件“TTAT”抑制p/CAF的表達(dá),并發(fā)現(xiàn)在三個(gè)連續(xù)的TTAT位點(diǎn)之間的距離影響HOXA10的生物學(xué)效應(yīng)；
　　 3．體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明在胚胎著床窗口期p/CAF的表達(dá)與HOXA10呈相反趨勢，并且子宮內(nèi)過表達(dá)p