巴戟天中多農(nóng)藥殘留檢測及防霉變儲藏規(guī)范研究.pdf

1、巴戟天（Morinda officinalis）為茜草科（Rubiaceae）巴戟天(Morinda officinalisHow.)的干燥根，是我國著名的四大南藥之一，同時具有“藥用”和“保健”功能，已被開發(fā)制成多種保健食品。近年來，隨著“大健康時代”的到來，一直作為傳統(tǒng)中藥的巴戟天呈現(xiàn)了較好的應(yīng)用和開發(fā)前景，其有效性和安全性也成為人們普遍關(guān)注的議題。巴戟天在熱帶和亞熱帶地區(qū)種植和生長需要使用農(nóng)藥來控制病蟲害以提高藥材產(chǎn)量，而巴戟天的

2、生長年限較長（一般5-7年），易導(dǎo)致農(nóng)藥在植物體內(nèi)蓄積和殘留，影響藥材的品質(zhì)、危害使用者的身體健康。此外，由于在溫暖、潮濕的環(huán)境中直接與土壤接觸五至七年，巴戟天在生長、加工和后期儲藏、運輸過程中極易污染多種真菌，發(fā)生霉變變質(zhì)和多種真菌毒素殘留，嚴(yán)重影響藥材的質(zhì)量、有效性和安全性。
　　本論文首先建立了簡便、可靠、靈敏的分析方法用于巴戟天中農(nóng)藥和真菌毒素多殘留及多種化學(xué)成分的高通量快速檢測，以全面、系統(tǒng)地綜合評價藥材的質(zhì)量和安全性;

3、然后，綜合運用真菌學(xué)、化學(xué)和分析化學(xué)等多學(xué)科技術(shù)手段并借助響應(yīng)面分析-中心組合設(shè)計法研究產(chǎn)毒菌株在巴戟天藥材上的生長情況和真菌毒素的累積規(guī)律及藥材主要化學(xué)成分的含量變化，進而初步總結(jié)巴戟天藥材的儲藏規(guī)范，以期為巴戟天的科學(xué)合理養(yǎng)護、保障藥材的質(zhì)量和有效性、安全性提供理論依據(jù)及數(shù)據(jù)支持，主要研究內(nèi)容如下:
　　1、改良的QuEChERS技術(shù)結(jié)合GC-FPD法同時檢測巴戟天中有機磷農(nóng)藥殘留
　　通過對樣品前處理各條件的優(yōu)化，建立

4、了用乙腈-水（9∶1，v/v）提取，采用PSA和GCB凈化樣品的前處理方法，運用氣相色譜-火焰光度法(GC-FPD)快速測定40批巴戟天樣品中30種有機磷農(nóng)藥殘留。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩批(5％)來源于同一產(chǎn)地的巴戟天樣品檢出有機磷農(nóng)藥（殺螟松）殘留，殘留量分別為0.0283 mg/kg和0.0348mg/kg，均超出了歐盟規(guī)定的最大殘留量(0.02 mg/kg)。本研究建立的方法快速、準(zhǔn)確、檢出限低、靈敏度高、重現(xiàn)性好，為其他根莖類藥材中農(nóng)藥殘

5、留檢測提供了參考。
　　2、建立ASE/MSPD-GC-ECD法同時檢測巴戟天中有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留
　　通過正交設(shè)計對萃取溫度、萃取溶劑和凈化劑弗羅里硅土的量進行考察，以優(yōu)化加速溶劑萃取輔助的基質(zhì)固相分散萃取(ASE/MSPD)提取有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的條件，萃取和凈化一步完成，結(jié)合氣相色譜-電子捕獲檢測器(GC-ECD)同時定性定量測定33種有機氯農(nóng)藥和9種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的污染水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3批樣品中檢測

6、到4種農(nóng)藥殘留（β-硫丹、四氯硝基苯、六氯苯和α-六六六），但污染水平均低于歐盟規(guī)定的最大殘留限量。本方法操作簡單、快速、自動化程度高、重復(fù)性好，可擴展用于其他復(fù)雜基質(zhì)中的有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的檢測。
　　3、建立超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(UFLC-MS/MS)同時檢測巴戟天中多種真菌毒素的污染水平
　　以甲醇-水（均含0.1％甲酸）（80∶20，v/v）溶液為溶劑，采用一步提取法制備樣品，通過色譜和質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化，建

7、立基于編程的多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）的UFLC-MS/MS法同時定性、定量檢測巴戟天中11種真菌毒素。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2批巴戟天樣品中檢測出5種真菌毒素，污染水平均低于歐盟規(guī)定的最大殘留量。該方法靈敏度高、選擇性和重復(fù)性好、回收率較高、檢測速度快，適用于復(fù)雜基質(zhì)巴戟天藥材中多種真菌毒素的快速分析與篩查。
　　4、采用HPLC-DAD法測定巴戟天中環(huán)烯醚萜苷類成分的含量和化學(xué)指紋圖譜，結(jié)合化學(xué)計量學(xué)技術(shù)建立藥材的質(zhì)量控制新模式
　　

8、采用超聲提取法制備樣品，結(jié)合高效液相色譜-二極管陳列檢測器(HPLC-DAD)對巴戟天中兩種主要環(huán)烯醚萜苷進行含量測定，并建立40批巴戟天樣品的指紋圖譜，不僅能夠?qū)崿F(xiàn)對指標(biāo)成分的定量測定，亦能獲得不同批次樣品間豐富的化學(xué)信息。然后，利用化學(xué)計量學(xué)方法(相似度分析(SA)、聚類分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判別分析(PL S-DA))對實驗數(shù)據(jù)進行解析，旨在全面地反映巴戟天的質(zhì)量，為該藥材的質(zhì)量控制提供研究基礎(chǔ)。

9、r>　　5、采用響應(yīng)面中心組合設(shè)計法(RSM-CCD法)，結(jié)合“反式”培養(yǎng)模式考察巴戟天藥材最佳的儲藏條件，為初步制定其儲藏規(guī)范提供依據(jù)
　　選取黃曲霉毒素的主要產(chǎn)毒菌株Asp.flavus3.4410為模式菌，將已滅菌的巴戟天藥材浸染該菌株后，于不同溫濕度環(huán)境下儲藏進行“反式”培養(yǎng)。采用HPLC-DAD法和UFLC-MS/MS法分別測定樣品中環(huán)烯醚萜苷類成分和4種黃曲霉毒素(AFB1，AFB2，AFG1和AFG2)的含量變化。經(jīng)