內(nèi)源性大麻素2-AG對(duì)同型半胱氨酸誘導(dǎo)的尾核神經(jīng)元損傷的拮抗作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究擬通過外源性途徑給予內(nèi)源性大麻素2-AG和應(yīng)用單?；视王ッ?MAGL)抑制劑URB602以提高內(nèi)源性途徑的2-AG的水平探討2-AG和URB602對(duì)同型半胱氨酸(Hcy)誘導(dǎo)的尾核神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用及其分子機(jī)制。
　　方法：(1)原代培養(yǎng)新生大鼠尾核神經(jīng)元，細(xì)胞培養(yǎng)第7天分別加入2-AG和URB602處理，作用12h后通過免疫印跡檢測(cè)內(nèi)源性大麻素2-AG或URB602對(duì)Hcy誘導(dǎo)的相關(guān)蛋白COX-2、NF-κB、p

2、-NF-κB、IκB-α、ERKl/2、p-ERKl/2、p38MAPK、p-p38MAPK、caspase-3、cleaved caspase-3、Bcl-2、p-Bcl-2的表達(dá)變化；(2) Hoechst染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡；(3)全細(xì)胞膜片鉗法檢測(cè)2-AG對(duì)Hcy所誘導(dǎo)尾核神經(jīng)元電壓門控鈉通道特性的變化。
　　結(jié)果：(1)內(nèi)源性大麻素2-AG或URB602均可抑制Hcy誘導(dǎo)的尾核神經(jīng)元COX-2、p-NF-κB、p-ERKl

3、/2、cleaved caspase-3的蛋白表達(dá)增加及拮抗Hcy誘導(dǎo)的IκB-α、p-Bcl-2表達(dá)減少，且2-AG或URB602的這一效應(yīng)是通過CB1受體介導(dǎo)的。(2) Hcy處理尾核神經(jīng)元12 h后，尾核神經(jīng)元表現(xiàn)為細(xì)胞核固縮或呈碎塊狀致密濃染等典型的凋亡特征,但給予2-AG或URB602后核固縮細(xì)胞的數(shù)目明顯減少，且2-AG或URB602的這種拮抗效應(yīng)為CB1受體的拮抗劑SR1所抑制。(3)2-AG可抑制Hcy誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的尾核

4、神經(jīng)元的電壓門控鈉通道電流增加，此效應(yīng)為SR1所抑制。經(jīng)Hcy處理的尾核神經(jīng)元鈉通道激活曲線明顯左移及激活閾值降低為2-AG所抑制，該效應(yīng)可部分被SR1拮抗。Hcy和2-AG對(duì)鈉電流的失活均無作用。
　　結(jié)論：2-AG和MAGL抑制劑URB602對(duì)Hcy誘導(dǎo)的尾核神經(jīng)元的細(xì)胞毒性效應(yīng)均具有保護(hù)作用，其細(xì)胞分子機(jī)制可能是通過CB1受體介導(dǎo)的抑制C0X-2和ERK1/2/NF-κB信號(hào)途徑來實(shí)現(xiàn)的。本研究有助于理解內(nèi)源性大麻素2-AG