人參皂苷Rg1對MPTP誘導(dǎo)的帕金森病小鼠黑質(zhì)EphA4-ephrinA3表達(dá)的影響.pdf

1、背景：
　　帕金森?。≒arkinson'sdisease，PD）是高發(fā)于中老年人的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，發(fā)病率隨著年齡增高而升高，典型病理學(xué)變化是黑質(zhì)致密區(qū)多巴胺能神經(jīng)元的變性、喪失及紋狀體內(nèi)多巴胺數(shù)量減少，但其確切發(fā)病機(jī)制仍不明確。Eph家族蛋白是受體酪氨酸激酶家族最重要的成員，介導(dǎo)獨特的雙向信號傳導(dǎo)通路，在神經(jīng)發(fā)育和成年神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控方面具有重要作用。EphA4和ephrinA3廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在神經(jīng)損傷后表達(dá)上調(diào)，可能

2、參與帕金森病的發(fā)病過程。人參皂苷Rg1是在人參中提取的有效成份，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有營養(yǎng)和保護(hù)作用，其對帕金森病的神經(jīng)保護(hù)作用有待闡明。
　　目的：
　　觀察1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(1-methy-4-pheny-1，2，3，6-tetrahy-dropyrdine，MPTP)所致急性PD模型小鼠黑質(zhì)EphA4/ephrinA3表達(dá)的變化和人參皂苷Rg1對其表達(dá)的影響，探討MPTP誘導(dǎo)PD的分子機(jī)制，尋找

3、預(yù)防、治療PD的新靶點。
　　方法：
　　(1)實驗分組:C57BL/6小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為正常對照組、模型組、人參皂苷Rg1組、MPTP+人參皂苷Rg1+SQ22536組（SQ22536組）、MPTP+人參皂苷Rg1+H-89組(H89組)。
　　(2)模型制備及給藥:注射MPTP前，正常對照組和模型組腹腔注射0.9％生理鹽水(1ml/kg/d)，人參皂苷Rg1組、MPTP+人參皂苷Rg1+SQ225

4、36組和MPTP+人參皂苷Rg1+H89組腹腔注射人參皂苷Rg1（10 mg/kg/d），連續(xù)3天。3天后，對照組繼續(xù)腹腔注射0.9％生理鹽水(1ml.kg-1)，模型組、人參皂苷Rg1組、MPTP+人參皂苷Rg1+SQ22536組和MPTP+人參皂苷Rg1+H-89組腹腔注射MPTP(20mg.kg-1)，均注射4次，每次間隔2小時。MPTP+人參皂苷Rg1+SQ22536組，在首次注射MPTP前半個小時腹腔注射一次SQ22536(1

5、 mg/kg);MPTP+人參皂苷Rg1+H-89組，在首次腹腔注射MPTP前半個小時腹腔注射一次H89(1 mg/kg)。
　　(3)游泳實驗:評價小鼠的行為學(xué)變化。
　　(4) HE染色:觀察小鼠黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元形態(tài)學(xué)及數(shù)量變化。
　　(5) RT-PCR:檢測小鼠黑質(zhì)區(qū)EphA4和ephrinA3 mRNA的表達(dá)水平。
　　(6) Western blotting:檢測小鼠黑質(zhì)區(qū)EphA4和ephrin

6、A3蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　(1)小鼠一般行為學(xué)變化首次注射MPTP后，模型組表現(xiàn)出豎毛、翹尾、打轉(zhuǎn)等癥狀，最后1次注射MPTP后，模型組均出現(xiàn)肌肉僵直、震顫、步態(tài)不穩(wěn)、行動遲緩等癥狀，SQ22536組和H89組在最后一次注射MPTP后也不同程度的出現(xiàn)上述癥狀，人參皂苷Rg1組與模型組相比上述行為學(xué)癥狀出現(xiàn)晚且輕;對照組未出現(xiàn)上述行為學(xué)變化。
　　游泳實驗:不同時間點的模型組、SQ22536組和H89組游泳實

7、驗評分均顯著低于對照組和人參皂苷Rg1組(P＜0.01)，SQ22536組和H89組游泳實驗評分均顯著高于模型組(P＜0.01)。
　　(2)HE染色結(jié)果光鏡下觀察可見黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元軸突變短，模型組小鼠黑質(zhì)區(qū)神經(jīng)元數(shù)量(31.500±1.049)顯著低于對照組（39.667±1.211，t=-12.486，P=0.000）、人參皂苷Rg1組（35.000±0.816，t=-6.22，P=0.000）、SQ22536組(33.0

8、00±1.414,t=-1.964,P=0.039)及H89組(33.167±1.169,t=-2.599,P=0.023);人參皂苷Rg1組黑質(zhì)區(qū)神經(jīng)元數(shù)量顯著高于SQ22536組（t=2.898，P=0.008）及H89組(t=3.051，P=0.013)。方差分析表明組間差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(F=42.021，P=0.000)。
　　(3) RT-PCR結(jié)果①模型組小鼠黑質(zhì)EphA4 mRNA表達(dá)水平(0.404±0.069

9、)顯著高于對照組（0.121±0.045，t=10.317，P=0.000）、人參皂苷Rg1組(0.191±0.041，t=0.702,P=0.000)、SQ22536組（0.319±0.080,t=2.413,P=0.008）及H89組（0.307±0.077，t=3.205，P=0.003）;人參皂苷Rg1組EphA4 mRNA表達(dá)水平顯著低于SQ22536組（t=-0.423，P=0.000）及H89組（t=-0.381，P=0.

10、000）。方差分析表明組間差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（F=27.160，P=0.000）。②模型組小鼠黑質(zhì)ephrinA3mRNA表達(dá)水平(0.652±0.056)顯著高于對照組(0.202±0.025，t=21.970，P=0.000)、人參皂苷Rg1組(0.508±0.046，t=5.945，P=0.000)、SQ22536組(0.562±0.071，t=2.973，P=0.000)及H89組（0.615±0.034，t=1.723，P=

11、0.048）;人參皂苷Rg1組ephrinA3 mRNA表達(dá)水平顯著低于SQ22536組（t=-1.915，P=0.029）及H89組（t=-5.557，P=0.000）。方差分析表明組間差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(F=115.837，P=0.000)。
　　(4) Western blotting結(jié)果①模型組小鼠黑質(zhì)EphA4蛋白表達(dá)水平(0.710+0.044)顯著高于對照組(0.562±0.011，t=8.921，P=0.000)

12、、人參皂苷Rg1組(0.636±0.056,t=4.786,P=0.000）、SQ22536組(0.696±0.040,t=2.056,P=0.046)及H89組(0.680±0.031，t=1.654，P=0.026);人參皂苷Rg1組EphA4蛋白表達(dá)水平顯著低于SQ22536組（t=-2.730，P=0.009）及H89組（t=-2.477，P=0.017）。方差分析表明組間差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(F=23.359，P=0.000）

13、。②模型組小鼠黑質(zhì)ephrinA3蛋白表達(dá)水平(0.768±0.053)明顯高于對照組(0.255±0.046，t=19.213，P=0.000)、人參皂苷Rg1組（0.650±0.029，t=5.840，P=0.000）、SQ22536組(0.700±0.064，t=2.116，P=0.041)及H89組（0.709±0.066，t=2.213，P=0.033）;人參皂苷Rg1組ephrinA3蛋白表達(dá)水平顯著低于SQ22536組（t