1,25-(OH)2-vitamin D3聯(lián)合α-干擾素在抗肝纖維化中對肝星狀細胞的影響和作用.pdf

1、目的：
　　觀察1，25-(OH)2-vitamin D3聯(lián)合α-干擾素(interferonα，IFN-α)對肝星狀細胞纖維化相關指標表達情況的影響。評價兩者藥物聯(lián)合作用在肝臟纖維化時對HSCs影響效果，并探討可能的抗肝纖維化的調(diào)節(jié)機制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)鼠星狀細胞HSCs，分別用1，25-(OH)2-vitamin D3和IFN-α進行刺激和兩者共同刺激，用MTT法觀察各實驗組HSCs增殖情況;采用Real

2、-time PCR檢測各組HSCs表達CoI1α1、MMP-9和TIMP-1的mRNA的水平;應用Western Blot檢測TGF-β受體和Smad3蛋白的表達情況以及ELISA方法檢測細胞因子TGF-β、IL-6、IL-10和TNF-α的表達水平。體內(nèi)實驗應用CCL4誘導肝纖維化小鼠，經(jīng)過1，25-(OH)2-vitamin D3和IFN-α單獨和聯(lián)合治療后，通過病理HE染色和Masson染色觀察炎癥細胞浸潤及膠原纖維沉積情況。

3、r>　　結果：
　　MTT法檢測HSCs增殖情況顯示不論是否存在PDGF干預，1，25-(OH)2-vitamin D3和IFN-α單獨刺激和聯(lián)合應用與正常組相比，細胞增殖均受到抑制(P＜0.05)，且細胞周期蛋白D1表達單獨刺激下均明顯降低。Real-time PCR檢測CoI1α1和TIMP-1經(jīng)過兩者單獨和聯(lián)合刺激后mRNA均明顯下降而MMP-9則明顯上升(P＜0.05)。Western Blot法檢測TGF-β受體和Sma

4、d3蛋白聯(lián)合治療組比單獨治療組表達水平有所減少。促纖維化因子TGF-β與其受體結果相反，治療后表達水平下降，但是聯(lián)合與單獨治療無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。促進炎癥現(xiàn)象發(fā)生的細胞因子IL-6和TNF-α經(jīng)過單獨和聯(lián)合治療后比正常組相比明顯降低而炎癥抑制性因子IL-10則明顯上升(P＜0.05)，IL-6聯(lián)合治療后表達水平比單獨治療顯著增加，但與正常組相比表達仍然明顯下降(P＜0.05)。
　　結論：
　　體外細胞實驗證實，在