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文檔簡介
1、目的:
腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的腫瘤,約占顱內(nèi)腫瘤的40%-60%。由于其侵襲特性及由低級別向高級別轉(zhuǎn)化的趨勢,使得手術治療難以根治腫瘤,且放療和化療效果不佳,術后復發(fā)率高,預后差,死亡率高。而癌基因、抑癌基因在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用,其中原癌基因的激活與抑癌基因的失活使其對細胞周期及細胞凋亡的調(diào)節(jié)失控。野生型p53(wtp53)作為一種常見的抑癌基因,其主要生物學功能是通過一系列信號轉(zhuǎn)導通路調(diào)節(jié)細胞周期及誘
2、導細胞凋亡來維持細胞基因組的穩(wěn)定性,從而抑制腫瘤的發(fā)生。本文旨在探討超聲靶向破壞微泡(UTMD)技術增強wtp53基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細胞的可行性,同時對該轉(zhuǎn)染體系的微泡濃度、質(zhì)粒濃度等參數(shù)進行優(yōu)化。
方法:
將體外培養(yǎng)的鼠膠質(zhì)瘤C6細胞懸液分為空白對照組、質(zhì)粒+超聲組、質(zhì)粒+微泡組、超聲+微泡組、質(zhì)粒+超聲+微泡組;并將質(zhì)粒+超聲+微泡組按微泡濃度分為5%、10%、20%、30%、40%;再按質(zhì)粒濃度分為5μg/m
3、l、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、30μg/ml。輻照條件:采用頻率1MHz、聲強0.8W/cm2、占空比20%、持續(xù)時間50s。在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24h-48h,用熒光顯微鏡觀察細胞轉(zhuǎn)染率、臺盼藍染色法檢測細胞存活率、逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測膠質(zhì)瘤C6細胞中的wtp53mRNA表達量、流式細胞儀檢測C6細胞凋亡百分比及細胞周期分布。
結果:
1、微泡濃度為20%、30%時,細胞
4、轉(zhuǎn)染效率較高,但微泡濃度為30%的C6細胞存活率比微泡濃度為20%的降低,且有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
質(zhì)粒濃度為15μg/ml時,細胞轉(zhuǎn)染效率最高(P<0.05),而C6細胞存活率有所下降(P<0.05);質(zhì)粒濃度為20μg/ml、30μg/ml時細胞存活率顯著下降(P<0.01)。
因此,微泡濃度20%、質(zhì)粒濃度15μg/ml為該轉(zhuǎn)染體系最佳參數(shù)。
2、UTMD作為一種安全有效的轉(zhuǎn)染方法,目的基因可
5、以在細胞內(nèi)穩(wěn)定表達,并發(fā)揮其相關效應。
超聲+微泡組的細胞存活率與其他組相比(除質(zhì)粒+超聲+微泡組),差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
與其他組比較,質(zhì)粒+超聲+微泡組細胞存活率的降低有統(tǒng)計學意義(P<0.05);質(zhì)粒+微泡+超聲組的轉(zhuǎn)染效率最高,轉(zhuǎn)染細胞中的wtp53mRNA的表達量增多,流式細胞儀分析細胞凋亡百分比明顯增高,細胞周期G0/G1期細胞數(shù)增多(P<0.05)。
結論:
UTMD可
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