BADH基因轉(zhuǎn)化國槐及黃金槐的研究.pdf

1、山東省有大量的濱海和內(nèi)陸鹽堿地，培育和選擇抗鹽堿植物種質(zhì)是我省林木育種的重要目標(biāo)。國槐(Sophora japonica L)、黃金槐(Sophorajaponica var golden)是蝶形花科落葉喬木，是優(yōu)良的多用途樹種，具有重要的生態(tài)和經(jīng)濟(jì)利用價值。本研究以國槐轉(zhuǎn)rd29A基因植株為材料，進(jìn)行了相關(guān)耐鹽生理生化指標(biāo)的測定研究，為耐鹽新種質(zhì)試驗推廣提供了理論基礎(chǔ)，并進(jìn)一步導(dǎo)入BADH(山菠菜甜菜堿醛脫氫酶)基因，獲得了轉(zhuǎn)rd29

2、A和BADH兩個基因的國槐株系：同時，以黃金槐組培苗為材料，轉(zhuǎn)入BADH基因，獲得了耐鹽新種質(zhì)。具體結(jié)果如下： 1.以轉(zhuǎn)rd29A基因國槐株系及其受體親本試管苗為材料，在NaCl脅迫下，分別在處理后不同時間測定了耐鹽生理指標(biāo)。結(jié)果表明：在0.6％NaCl脅迫下，國槐植株內(nèi)可溶性糖含量、脯氨酸含量，丙二醛含量以及相對電導(dǎo)率都隨NaCl脅迫時間的延長而增加；與受體親本植株相比，轉(zhuǎn)基因株系的葉綠素含量、細(xì)胞滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量和細(xì)胞膜穩(wěn)定

3、性提高。說明轉(zhuǎn)rd29A基因的國槐植株耐鹽性得到提高。 2.運用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法以轉(zhuǎn)rd29A基因國槐為材料繼續(xù)轉(zhuǎn)入BADH基因并對其轉(zhuǎn)化方法進(jìn)行了優(yōu)化。研究結(jié)果表明：適宜的農(nóng)桿菌濃度OD600值為0.3-0.5，侵染時間為15-20 min;平板培養(yǎng)法活化農(nóng)桿菌、延遲兩周篩選、用200μM AS溶液浸泡傷口可以提高轉(zhuǎn)化率；轉(zhuǎn)化前的低溫預(yù)培養(yǎng)及轉(zhuǎn)化時抽真空的方式不能提高轉(zhuǎn)化效率。經(jīng)過以上條件的優(yōu)化獲得了PCR檢測呈陽性的植株，陽性檢

4、測率為16.7％，表明外源目的基因已整合到國槐基因組中。 3.以黃金槐大葉片作為外植體，篩選出誘導(dǎo)不定芽分化的最佳培養(yǎng)基為：MS+6-BA4 mg/L+IBA0.5 mg/L，確定了黃金槐遺傳轉(zhuǎn)化中適宜的抑菌濃度為Cef400 mg/L，同時也確定了抗生素的臨界濃度及適宜的添加時間，試驗選用Kan濃度為100 mg/L作為篩選轉(zhuǎn)化體的適宜濃度，侵染10-15 d后添加Kan可獲得較多的抗性芽；并利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將BADH基因