UHRF2通過其PHD結(jié)構(gòu)域與H3K9ac的相互作用以及下調(diào)HepG2肝癌細胞中H3K9ac水平.pdf

1、目的:
　　研究UHRF2與組蛋白H3乙?；℉3K9ac和K3K14ac）的相互作用及兩者相互作用結(jié)合區(qū)域的鑒定。探討UHRF2分別在正常細胞和癌細胞中對K3K9ac和H3K14ac的影響及其分子機制。
　　方法:
　　1.在HEK293、LO2和HepG2細胞中轉(zhuǎn)染UHRF2，進行免疫熒光后，激光共聚焦檢測UHRF2與組蛋白H3、H3K9ac和H3K14ac在細胞內(nèi)的共定位現(xiàn)象。再在上述細胞中轉(zhuǎn)染UHRF2和空載質(zhì)

2、粒，采用免疫沉淀技術(shù)，研究UHRF2與H3K9ac和H3K14ac的相互作用。
　　2.通過雙酶切鑒定UHRF2各缺失體質(zhì)粒，將各缺失體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293、LO2和HepG2細胞，進行免疫沉淀實驗。研究UHRF2與H3K9ac和H3K14ac相互作用的結(jié)合區(qū)域。
　　3.通過免疫印跡和免疫組化化學(xué)方法檢測內(nèi)源性UHRF2、H3、H3K9ac和H3K14ac蛋白在HEK293、LO2和HepG2細胞中以及在肝癌和癌旁組織中的

3、表達情況。
　　4.采用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)上調(diào)UHRF2蛋白，通過免疫印跡檢測UHRF2在HEK293、LO2和HepG2細胞中對H3K9ac和H3K14ac影響。同時通過免疫組織化學(xué)檢測肝癌標本中UHRF2蛋白水平的高低與H3K9ac和H3K14ac蛋白表達情況的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.激光共聚焦實驗結(jié)果顯示：UHRF2與H3、H3K9ac和H3K14ac在HEK293、LO2和HepG2細胞內(nèi)均有存在共定位現(xiàn)象。免

4、疫沉淀實驗結(jié)果表明:UHRF2與H3K9ac在上述細胞中相結(jié)合存在相互作用。
　　2.免疫沉淀實驗結(jié)果表明:在HEK293、LO2和HepG2細胞中PHD結(jié)構(gòu)域是UHRF2與H3K9ac相互作用的關(guān)鍵結(jié)合區(qū)域，此外在HepG2細胞中除了PHD結(jié)構(gòu)域外，YDG結(jié)構(gòu)域也是UHRF2與H3K9ac相互作用關(guān)鍵結(jié)合區(qū)域。
　　3.免疫印跡結(jié)果顯示：H3K9ac和H3K14ac在HepG2肝癌細胞中高表達。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:UHR

5、F2、H3K9ac和H3K14ac在肝癌組織中高表達。
　　4.Western blot結(jié)果表明：上調(diào)UHRF2后，在HEK293和LO2正常細胞中H3K9ac蛋白表達增多，而在HepG2肝癌細胞中H3K9ac蛋白表達減少。同時免疫組織化學(xué)結(jié)果表明：H3K9ac蛋白在高表達UHRF2的肝癌組織較低表達UHRF2的肝癌組織少。
　　結(jié)論:
　　UHRF2通過其PHD結(jié)構(gòu)域與H3K9ac相互作用。在HepG2肝癌細胞中，過