NG2在肝癌中的表達以及與患者預后相關性研究.pdf

1、背景:
　　原發(fā)性肝癌是一種非常常見的惡性腫瘤，在中國的發(fā)病率和死亡率已成為世界上最高的，據估計全世界每年有55％的新增病例和死亡。肝癌是包括指原發(fā)性肝癌和繼發(fā)性肝癌，而發(fā)病機制尚未明確的原發(fā)性肝癌有更高的發(fā)病率和致死率，因此對人類健康造成很大的危害。全球肝癌發(fā)病率存在著地區(qū)差異。經濟欠發(fā)達的一些亞洲、非洲地區(qū)，發(fā)病率極高。據統(tǒng)計，中國的肝癌病人數約占全世界的50％。目前肝癌的治療方案主要取決于疾病的分期、殘余肝功能及患者身體狀況

2、。手術治療對于早期肝癌是最好的治療方法。然而，由于絕大多數肝癌患者在肝癌早期階段并無明顯的臨床表現(xiàn)，因而未引起患者的足夠重視，等至肝癌確診時腫瘤已發(fā)生擴散或遠處轉移，失去了手術機會。而即使經過了手術治療患者的5年生存率也不到35％。為了改善患者的術后預后和生活質量，關鍵是尋找一個與肝癌進展、侵襲、轉移和復發(fā)密切相關并影響患者預后的獨立危險因素。
　　NG2是一種硫酸軟骨素蛋白多糖(chondroitin sulphatepeote

3、oglycan，CSPG)，存在于許多祖細胞表面具有完整跨膜結構的Ⅰ型跨膜蛋白。雖然在人類的正常組織中有表達，但表達量微乎其微，然而在胰腺癌、惡性黑色素瘤、胃癌、大腸癌等許多人類癌癥和軟組織肉瘤、膠質瘤、星形細胞瘤和髓系白血病中都普遍存在過度表達的現(xiàn)象。另外，NG2在皮膚的鱗狀細胞癌和基底細胞樣乳腺癌的腫瘤干細胞中表達，這說明NG2與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復發(fā)和轉移有關。雖然NG2并非癌基因，但在癌基因相關的信號通路中，NG2可以發(fā)揮激活信

4、號通路、連接信號分子的作用。例如，NG2可以調節(jié)細胞粘附于膠原蛋白等細胞外基質(ECM)成分從而為腫瘤細胞的侵襲轉移提供成熟的微環(huán)境。在惡性分化細胞、祖細胞及各種腫瘤干細胞的細胞膜上均有NG2高表達，而且NG2在這些細胞生長，遷移過程中起著至關重要的作用。在正常成人的大腦組織內，雖然僅有5％的神經細胞表達NG2，但卻具有廣泛的解剖分布，在循環(huán)系統(tǒng)，超過70％祖細胞高度表達NG2。在神經系統(tǒng)的NG2+細胞具有更強的增殖和自我更新能力，無論

5、在正常情況還是在病理條件下均能分化為不同類型的神經細胞。目前尚無確切研究表明肝癌細胞的侵襲和轉移機制中是否有NG2分子的參與。因此，本研究將探討NG2在肝癌組織中的表達情況，分析其與肝癌的臨床病理指標、復發(fā)和生存率是否具有相關性，以及它是否可以作為一種有效的臨床預后評價指標，為其臨床診療、預后判斷提供更多的一些依據。
　　目的:
　　采用IHC、RT-PCR、WB方法從蛋白和mRNA水平檢測NG2蛋白的表達水平，探討在肝癌中

6、NG2的表達水平與患者臨床病理參數的相關性以及NG2在肝癌患者預后評估中的作用和意義。
　　方法:
　　1.根據免疫組化染色的陽性細胞數目以及染色強度對NG2的表達量進行半定量分析，采用免疫組化染色的方法對132例肝癌標本以及96例癌旁組織標本的NG2蛋白表達量進行分析。為了確定免疫組化的染色結果，采用qRT-PCR和Western blot對肝癌和癌旁組織中的NG2蛋白表達進一步分析驗證;
　　2.NG2蛋白表達量與

7、肝癌臨床病理參數相關性的分析采用卡方檢驗，NG2表達量與肝癌患者生存率的相關性采用Kaplan-Meier法分析并用log-rank檢測;
　　3.為了進一步確認NG2評價作用，采用Cox多元線性回歸分析所有涉及的臨床病理指標，評估其對肝癌患者總體生存和無瘤生存率的影響。
　　結果:
　　1.根據分析發(fā)現(xiàn)在肝癌標本中高表達NG2蛋白者占據所有肝癌標本的63.6％(84/132)然而癌旁組織標本中高表達NG2蛋白者占據所

8、有癌旁標本的28.1％(27/96)。NG2蛋白在肝癌中的表達量顯著高于癌旁組織具有統(tǒng)計學意義(p＜0.0001)。
　　2.采用卡方檢驗或者Fisher確切概率法檢驗分析發(fā)現(xiàn)肝癌患者的肝癌組織中NG2蛋白的表達量與腫瘤的分化程度(X2value=9.436，p=0.0089)，是否復發(fā)(X2value=5.769，p=0.0163)，TNM分期(X2value=8.976，p=0.0027)，以及有無血管侵襲(X2value=5

9、.476，p=0.0193)密切相關具有統(tǒng)計學意義。然而分析發(fā)現(xiàn)肝癌患者的肝癌組織中NG2蛋白的表達量與年齡、性別、腫瘤大小、血清AFP水平、腫瘤大小以及腫瘤有無包膜沒有統(tǒng)計學意義上的相關性。log-rank檢驗發(fā)現(xiàn)肝癌患者的肝癌組織中NG2蛋白的表達量與肝癌患者的生存率有統(tǒng)計學相關性。高表達NG2蛋白的肝癌患者其總體生存率要顯著低于低表達NG2蛋白的肝癌患者(29.2％ vs9.5％，p＜0.001)。而且，高表達NG2蛋白的肝癌患者

10、其無瘤生存率要顯著低于低表達NG2蛋白的肝癌患者(15.2％vs6.7％，p＜0.001)。
　　3.Cox多元線性回歸發(fā)現(xiàn)NG2表達量(HR=2.035，p=0.002)，血清AFP水平(HR=1.903，p=0.003)，TNM分期(HR=2.039，p=0.001)，以及有無血管侵襲(HR=1.938，p=0.002)是影響肝癌患者總體生存率(0S)獨立危險因素。與此同時，NG2表達量(HR=1.974，p=0.003)，血

11、清AFP水平(HR=1.767，p=0.008)，TNM分期(HR=2.078，p=0.001)，腫瘤有無包膜(HR=0.652，p=0.045)，以及有無血管侵襲(HR=1.941，p=0.002)是影響肝癌患者無瘤生存率(DFS)的獨立危險因素。
　　結論:
　　1.經過免疫組化、western blot、以及PCR分析發(fā)現(xiàn)NG2在肝癌中的表達量顯著高于癌旁組織具有統(tǒng)計學意義;
　　2.NG2在肝癌中的表達量與腫瘤