CSN6在胃癌中的表達(dá)及其與患者預(yù)后的相關(guān)性.pdf

1、研究目的：
　　胃癌是全球常見的惡性腫瘤之一，是我國(guó)第二大導(dǎo)致死亡的惡性腫瘤。隨著胃鏡普查、治療方案的聯(lián)合應(yīng)用及分子靶向治療的發(fā)展，胃癌患者的生存期有所延長(zhǎng)，但進(jìn)展期患者的5年生存率仍不容樂觀。因此，探尋新的分子生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)于提高胃痛診斷的準(zhǔn)確性、提供胃癌治療的新靶點(diǎn)以及判斷患者預(yù)后有著至關(guān)重要的意義。
　　COP9信號(hào)復(fù)合體(COP9 signalosome，CSN)是一種與植物光形態(tài)發(fā)生調(diào)節(jié)相關(guān)的結(jié)構(gòu)高度保守的多亞基蛋

2、白復(fù)合體，最早在擬南芥突變體中發(fā)現(xiàn)。在哺乳動(dòng)物中，CSN包括八個(gè)亞單位，依次命名為CSN1～CSN8。該復(fù)合體不僅在結(jié)構(gòu)上與26S蛋白酶體的19S亞單位“蓋子”部分具有同源性，在功能上也有相似之處，故CSN在泛素化-蛋白降解途徑中具有重要的調(diào)節(jié)作用。CSN6作為CSN的一個(gè)重要亞基，涉及胚胎發(fā)育、細(xì)胞周期調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種生物學(xué)功能。近年來(lái)，隨著對(duì)CSN6研究的深入，其與腫瘤的相關(guān)性成為研究的熱點(diǎn)。CSN6主要通過調(diào)控泛素化介導(dǎo)的蛋白

3、質(zhì)降解，影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，而參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，CSN6在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)（例如:乳腺癌，卵巢癌，結(jié)腸癌），且CSN6有望成為結(jié)腸癌潛在的預(yù)后標(biāo)志物。鑒于CSN6在胃癌中尚未有所報(bào)道，本研究旨在探討CSN6在胃癌細(xì)胞系和組織中的表達(dá)，分析CSN6與臨床病理參數(shù)的關(guān)系及其對(duì)胃癌患者預(yù)后的影響，為胃癌的臨床輔助診斷、靶向治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　研究方法：
　　1.運(yùn)用cBioportal網(wǎng)絡(luò)分析工具

4、對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)（Provisional數(shù)據(jù)集，Nature2014的數(shù)據(jù)集）中CSN6的基因改變頻率進(jìn)行分析。
　　2.運(yùn)用Western-blotting方法檢測(cè)CSN6在永生化的正常胃粘膜細(xì)胞株及不同胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況。
　　3.運(yùn)用Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)分析CSN6 mRNA在不同病理類型的胃癌組織與正常胃黏膜表達(dá)的差異性。
　　4.運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)90例胃癌及相應(yīng)癌旁組織中CSN6的表達(dá)情況

5、，分析CSN6的表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系。應(yīng)用Kaplan-Meier法對(duì)CSN6在胃癌組織中的表達(dá)與患者生存期之間的關(guān)系進(jìn)行分析，應(yīng)用Cox風(fēng)險(xiǎn)比例模型和受試者工作特征曲線（ROC曲線）對(duì)CSN6在胃癌中的診斷價(jià)值進(jìn)行評(píng)估。
　　5.運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)在線生存期分析軟件Kaplan-Meier plotter對(duì)876例胃癌患者中CSN6mRNA的表達(dá)及其與生存期的關(guān)系進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　1.對(duì)TCGA，Prov

6、isional數(shù)據(jù)集中393例胃癌患者的基因表達(dá)分析結(jié)果表明，CSN6出現(xiàn)44.8％的擴(kuò)增(176/393)。對(duì)TCGA，Nature2014數(shù)據(jù)集中287例胃癌患者的基因表達(dá)分析結(jié)果表明， CSN6出現(xiàn)42.8％的擴(kuò)增(123/287)。
　　2.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與永生化的正常胃黏膜細(xì)胞株相比，CSN6在多株胃癌細(xì)胞系中也呈高表達(dá)（差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05）。
　　3.Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)分析

7、結(jié)果表明， CSN6 mRNA在腸型胃癌，彌漫型胃癌以及混合型胃癌中的表達(dá)水平均高于正常胃黏膜組織(P＜0.05)。
　　4.胃癌組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明，CSN6在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率(62.2％，56/90)高于相應(yīng)癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率(41.4％，37/90)(P＜0.05)。CSN6的表達(dá)水平與患者腫瘤大小呈正相關(guān)(P＜0.05)，與年齡、性別、組織學(xué)類型、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AJCC TNM分期等指標(biāo)無(wú)明顯相關(guān)

8、(P＞0.05)。
　　5.根據(jù)本實(shí)驗(yàn)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，用Kaplan-Meier法分析CSN6蛋白在胃癌中的表達(dá)及其與患者生存期之間的關(guān)系，結(jié)果顯示，高表達(dá)CSN6的患者生存期短于低表達(dá)的患者(P＜0.05)。用Cox模型對(duì)該組患者進(jìn)行單因素和多因素變量分析，結(jié)果顯示CSN6的表達(dá)水平與胃癌患者的生存期顯著相關(guān)，為獨(dú)立預(yù)后因素(P＜0.05)。繪制ROC曲線，評(píng)估CSN6對(duì)胃癌預(yù)后判斷的準(zhǔn)確性，結(jié)果顯示AUC=0.622(9

9、5％ CI=0.513-0.722)，敏感性為71.43％，特異性為52.94％。
　　6.分析Kaplan-Meier plotter中876例胃癌患者的CSN6 mRNA的表達(dá)水平與總生存期的關(guān)系，結(jié)果顯示， CSN6高表達(dá)的胃癌患者比低表達(dá)的患者總生存期短(P＜0.001)，與免疫組化結(jié)果一致。
　　結(jié)論：
　　本研究結(jié)果表明，CSN6在胃癌細(xì)胞株及胃癌組織中均呈高表達(dá)。CSN6的表達(dá)水平與胃癌患者的生存期顯著相