纖溶酶原受體烯醇化酶1在前列腺癌細(xì)胞表面結(jié)合分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的：纖溶酶通過(guò)參與細(xì)胞外基質(zhì)降解、組織重構(gòu)和血管發(fā)生等促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。烯醇化酶1（Enolase, ENO1）是主要纖溶酶原受體之一，在纖溶酶的激活和活性維持中發(fā)揮重要作用。前期研究發(fā)現(xiàn)腫瘤微環(huán)境中的 ENO1能夠結(jié)合到前列腺癌細(xì)胞表面，作為纖溶酶原的受體促前列腺癌細(xì)胞遷移。然而，ENO1在前列腺癌表面結(jié)合的分子機(jī)制尚不清楚。本文尋找介導(dǎo) ENO1在前列腺癌細(xì)胞表面結(jié)合的靶分子，從而為設(shè)計(jì)阻斷 ENO1在細(xì)胞膜表面結(jié)合進(jìn)而抑制纖溶酶原

2、激活的多肽類(lèi)藥物或者小分子化合物提供依據(jù)。
　　方法：1.表達(dá) ENO1-AP融合蛋白，建立通過(guò)測(cè)定堿性磷酸酶活性來(lái)檢測(cè)ENO1與前列腺癌細(xì)胞結(jié)合能力的方法；2.檢測(cè)BPH-1、Du145、PC3三種前列腺癌細(xì)胞表面ENO1的結(jié)合能力，結(jié)合生物信息學(xué)以及實(shí)時(shí)定量RT-PCR分析尋找可能與 ENO1相互作用的細(xì)胞膜蛋白；3.采用 RNA干擾技術(shù)敲低 KCNMA1的表達(dá)，檢測(cè)ENO1在敲低KCNMA1基因的細(xì)胞表面的吸附能力；4. W

3、estern blot檢測(cè)原核表達(dá)ENO1-GST融合蛋白與PC3細(xì)胞表面蛋白的相互作用;5. GST-pulldown實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ENO1與KCNMA1細(xì)胞膜外區(qū)端肽段的相互作用。
　　結(jié)果：ENO1-AP可以通過(guò)ENO1吸附在前列腺癌細(xì)胞表面；缺失了C-端與纖溶酶原結(jié)合位點(diǎn)的 ENO1仍然可以吸附在前列腺癌細(xì)胞表面；生物信息學(xué)結(jié)合 RT-PCR分析顯示 KCNMA1可能是 ENO1在細(xì)胞膜表面結(jié)合的受體蛋白；KCNMA1敲低的前列