TAT-NBD抑制NF-κB活化在膽紅素誘導大鼠皮層星形膠質細胞炎癥反應中的作用.pdf

1、目的：
　　觀察反式激活蛋白-NEMO結合域（TAT-NBD）對膽紅素誘導的大鼠皮層星形膠質細胞核因子-κB（NF-κB）活化及炎癥反應的作用。
　　初步探究腹腔內注射TAT-NBD治療膽紅素腦病新生鼠對星形膠質細胞核因子-κB（NF-κB）活化的影響，能否改善運動、學習記憶能力。
　　方法：
　　分離、培養(yǎng)、鑒定SD新生鼠大腦皮層2代星形膠質細胞，隨機分為三組：對照組，膽紅素組，TAT-NBD干預組。免疫熒光染

2、色法觀察細胞形態(tài)，改良MTT法檢測細胞相對存活率，AnnexinV-FITC/PI雙染法觀察凋亡情況，Western blot檢測NF-κBp65表達，EMSA檢測NF-κB的入核、活化。ELISA檢測上清中炎癥因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平。
　　用5日齡SD新生鼠隨機分組后造模成三組：對照組，膽紅素組，TAT-NBD干預組。細胞免疫熒光觀測建模后24h各組腦組織切片中細胞形態(tài)和NF-κBp65表達；建模時及建模后3

3、d記錄新生鼠每天體重變化，記錄建模后各組新生鼠30d以內存活狀態(tài)；取28日齡各組SD大鼠進行轉棒測試和避暗實驗檢測平衡運動、學習記憶能力。
　　結果：
　　膽紅素組的NF-κBp65蛋白灰度比值顯著高于對照組（p<0.01），2h、12h達高峰（p<0.05）；TAT-NBD干預使NF-κBp65蛋白表達明顯低于膽紅素組（p<0.01）。IL-1β、TNF-α、IL-6的釋放與膽紅素誘導的NF-κBp65表達有時間相關性，于

4、12h達高峰，且TAT-NBD干預2h、12h的IL-1β、TNF-α、IL-6濃度均低于膽紅素組（p<0.01）。星形膠質細胞的存活率與膽紅素作用時間負相關，TAT-NBD干預2h、12h的相對存活率均高于膽紅素組（p<0.05）。TAT-NBD能維持細胞正常形態(tài)，減輕細胞凋亡和損傷。
　　建模后24h，膽紅素模型鼠腦組織中GFAP、NF-κBp65的表達及NF-κB入核、活化較對照組明顯增多，TAT-NBD干預可減少膽紅素組腦

5、組織中GFAP、NF-κBp65的表達和NF-κB的入核、活化。TAT-NBD干預組SD新生鼠建模后體重增長趨勢連續(xù)3d高于膽紅素組但無明顯差異（p>0.05），顯著低于對照組（p<0.01）；近期死亡率顯著低于膽紅素組（p<0.01）；遠期生存狀態(tài)較膽紅素組好轉差異無統(tǒng)計學意義。平衡運動和避暗逃避實驗中，TAT-NBD干預組在轉棒上停留時間及進入黑箱的潛伏期均顯著短于對照組（p<0.01），長于膽紅素組（p<0.05）。
　　結