焦亡在膽紅素誘導的大鼠皮層星型膠質細胞神經毒性中的作用研究.pdf

1、目的：
　　在原代培養(yǎng)大鼠皮層星型膠質中明確焦亡是否參與膽紅素誘導的神經細胞損傷及炎癥反應；調控焦亡是否能抑制膽紅素神經毒性，發(fā)揮抗炎保護作用。
　　在膽紅素腦病大鼠動物模型上初步探究抑制焦亡核心環(huán)節(jié)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（caspase1）活化，是否能減輕膽紅素神經毒性，改善膽紅素腦病模型鼠的生活能力。
　　方法：
　　原代培養(yǎng)大鼠皮層星型膠質細胞分為膽紅素組、VX-765組、對照組：Western blo

2、t檢測細胞caspase1蛋白和NLRP3蛋白的表達，改良MTT法檢測細胞存活率，比色法檢測細胞清乳酸脫氫酶(LDH)釋放率，EtBr/EthD2染色法檢測細胞膜通透性改變，TUNEL法檢測染色質DNA斷裂，ELISA法檢測培養(yǎng)液上清IL-1β和IL-18的水平。
　　建立膽紅素腦病動物模型，Western blot檢測腦組織caspase1蛋白的表達，ELISA法檢測炎癥因子IL-1β的水平，免疫熒光染色檢測腦組織 GFAP蛋白

3、的表達；VX-765干預后動態(tài)觀察各組新生鼠的神經系統(tǒng)臨床表現(xiàn)，記錄新生鼠體重變化評估生活能力
　　結果：
　　原代培養(yǎng)大鼠皮層星型膠質細胞，膽紅素干預6h、12h后，活化型caspase1和NLRP3蛋白表達顯著高于對照組（P＜0.05）；與膽紅素組相比，VX-765干預可抑制 caspase1活化（P＜0.05），提高細胞存活率（P＜0.05），降低LDH釋放率（P＜0.05），減少ErBr攝?。≒＜0.05），而不影響

4、EthD2攝取（P＞0.05），降低細胞TUNEL染色陽性率（P＜0.01），減少培養(yǎng)液上清IL-1β和IL-18的釋放（P＜0.01）。
　　膽紅素腦病動物模型，建模后12h，膽紅素組較對照組，腦組織中活化型caspase1表達增加（P＜0.05），IL-1β水平增高（P＜0.01），腦組織切片皮層區(qū)星型膠質細胞活化（P＜0.05）。與膽紅素組相比，VX-765組新生鼠建模后異常神經系統(tǒng)表現(xiàn)減少（P＜0.01），生活能力改善（P