魷魚墨多糖改善化療小鼠腸道黏膜免疫的作用及機(jī)理探討.pdf

1、我國魷魚資源豐富，且營養(yǎng)價(jià)值高，深受消費(fèi)者喜愛。但是魷魚墨囊作為加工廢料經(jīng)常被遺棄，這將導(dǎo)致環(huán)境污染等問題，也成為困擾魷魚加工企業(yè)的難題。篩選魷魚墨活性成分并加以利用，是實(shí)現(xiàn)魷魚精深加工的首選解決途徑。探究魷魚墨多糖的生理活性將為魷魚墨的高值化利用提供理論基礎(chǔ)，具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。
　　腸道粘膜免疫是機(jī)體免疫的重要組成部分，在應(yīng)激條件下（如化療、燒傷、營養(yǎng)不良、高壓力工作等），腸道粘膜免疫會(huì)急劇受損，包括腸道上皮屏障受損

2、、菌群移位，進(jìn)而導(dǎo)致持續(xù)惡心、嘔吐、消化吸收功能下降，甚至是腸炎、腸道感染等嚴(yán)重病癥的發(fā)生。本文成功從北太平洋魷魚（Ommastrephes bartrami）墨囊中提取出魷魚墨粗多糖(OBP)和純單一組分多糖SIP，并利用化療藥物環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide，Cy)建立化療致腸道粘膜損傷動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上研究了魷魚墨多糖對(duì)腸道粘膜免疫的保護(hù)作用及作用機(jī)理。
　　首先，我們探討了魷魚墨粗多糖OBP對(duì)化療小鼠腸道菌群

3、的結(jié)構(gòu)影響。腸道共生菌與宿主機(jī)體形成了一個(gè)相互作用且相互依賴的系統(tǒng)，當(dāng)這個(gè)微生態(tài)的穩(wěn)態(tài)被打破后，腸道的定植抵抗力大大降低，從而導(dǎo)致腸道中潛在性病原體的入侵和定植。通過構(gòu)建16S rDNA克隆文庫、PCR-RFLP和熒光定量PCR的方法對(duì)化療小鼠腸道菌群進(jìn)行了探究。研究結(jié)果表明，環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠腸道生物屏障有一定的損傷作用，造成細(xì)菌總量的上升;而魷魚墨多糖的攝入可以緩解和改善腸道細(xì)菌，降低細(xì)菌的總量。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，魷魚墨多糖可以通過提高有

4、益菌（如雙岐桿菌）和抑制有害菌（如擬桿菌）來調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，對(duì)保證人體健康、預(yù)防疾病具有重要作用。
　　化療藥物會(huì)損傷上皮細(xì)胞緊密連接，進(jìn)而造成上皮損傷、腸道菌群移位，給機(jī)體造成進(jìn)一步傷害。因此，我們探討了魷魚墨多糖OBP對(duì)腸道上皮屏障的影響，包括對(duì)上皮細(xì)胞緊密連接和粘附連接分子的表達(dá)量影響，并在組織學(xué)水平上進(jìn)行了觀察驗(yàn)證。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與化療小鼠相比，魷魚墨多糖OBP可以提高腸道上皮細(xì)胞緊密連接ZO-1和E-cadherin的表

5、達(dá)。同時(shí)，高劑量OBP可以使小鼠腸道的緊密連接蛋白ZO-2、ZO-3、Cingulin顯著提高。與模型組相比，Claudin-6、7沒有顯著提高，但低、中、高劑量OBP組小鼠的Claudin-2得到顯著提高。
　　環(huán)磷酰胺可顯著降低腸道SIgA的分泌，造成腸道獲得性免疫功能低下。而魷魚墨多糖OBP可以顯著提高腸道SIgA的含量，以更好地抵御細(xì)菌或病毒、抗原等的侵附。作用機(jī)理與其能夠增強(qiáng)小腸免疫細(xì)胞的正常分化、分泌免疫球蛋白以及增強(qiáng)

6、小腸上皮細(xì)胞中pIgR的表達(dá)密切相關(guān)。
　　在北太平洋魷魚墨粗多糖OBP的研究基礎(chǔ)上，我們分離純化了OBP中主要單一多糖組分SIP，證實(shí)SIP為粗多糖中促進(jìn)腸道SIgA分泌的主要活性成分，并探究了其促進(jìn)SIgA分泌的分子機(jī)制。魷魚墨多糖SIP對(duì)B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞的最終分化階段發(fā)揮了重要作用。SIP主要促進(jìn)了腸道免疫細(xì)胞IL-6、IL-10的表達(dá)分泌，最終促進(jìn)B細(xì)胞向IgA漿細(xì)胞轉(zhuǎn)化。
　　為模擬腸道上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)dIgA/pI

7、gA形成SIgA的過程，我們從IgA多發(fā)性骨髓瘤病人血清中分離獲得dIgA/pIgA，并構(gòu)建了表達(dá)人pIgR的三維上皮細(xì)胞模型。以dIgA/pIgA為轉(zhuǎn)運(yùn)底物孵育于構(gòu)建的三維細(xì)胞基底側(cè)，細(xì)胞頂側(cè)孵育魷魚墨純多糖SIP，觀察SIP能否促進(jìn)三維上皮細(xì)胞對(duì)dIgA/pIgA的轉(zhuǎn)運(yùn)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SIP對(duì)上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)dIgA/pIgA的速度并無顯著影響，但卻可以促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞系增殖，增加腸道上皮細(xì)胞pIgR總量，導(dǎo)致SIgA形成增多，從而發(fā)揮