S100A4對CNE2細(xì)胞侵襲及EMT的影響.pdf

1、目的：構(gòu)建 S100A4基因高表達(dá)載體，建立穩(wěn)定高表達(dá) S100A4基因的CNE2細(xì)胞系，研究S100A4轉(zhuǎn)入對CNE2細(xì)胞的影響；測定與分析EMT標(biāo)志物E-cadherin和Fibronectin、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2和MMP9表達(dá)水平，探討 S100A4基因表達(dá)與 CNE2細(xì)胞侵襲能力及EMT的關(guān)系。
　　方法：本研究通過培養(yǎng) CNE2細(xì)胞，獲取 cDNA，PCR擴(kuò)增S100A4片段，構(gòu)建高表達(dá) S100A4基因的pCMV-

2、S100A4重組質(zhì)粒；采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染 CNE2細(xì)胞，G418篩選，克隆挑選，建立S100A4穩(wěn)定高表達(dá)的CNE2細(xì)胞系，以pCMV-CNE2細(xì)胞系、以未轉(zhuǎn)染的CNE2細(xì)胞系為對照；Western blotting檢測S100A4蛋白的表達(dá)能力；MTT法繪制細(xì)胞生長曲線；Western blotting，檢測 E-cadherin、Fibronectin、MMP2及MMP9的表達(dá)；Transwell實(shí)驗(yàn)，檢測細(xì)胞侵襲能力變化。
　

3、　結(jié)果：1、成功構(gòu)建 pCMV-S100A4重組質(zhì)粒；2、pCMV-S100A4-CNE2細(xì)胞穩(wěn)定高表達(dá) S100A4；3、pCMV-S100A4-CNE2細(xì)胞系生長增殖速度加快；4、pCMV-S100A4-CNE2侵襲細(xì)胞計(jì)數(shù)增多；5、pCMV-S100A4-CNE2細(xì)胞 E-cadherin蛋白表達(dá)降低、Fibronectin、MMP2及MMP9表達(dá)增強(qiáng)。
　　結(jié)論：
　　1、S100A4導(dǎo)入 CNE2細(xì)胞，其生長增殖速