中藥坤泰膠囊對小鼠增殖期子宮內(nèi)膜厚度、EGF、IGF-1、PCNA及LIF蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的：
　　隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，人們的生活節(jié)奏不斷加快，生活環(huán)境污染程度的加重，不孕癥患病率有逐年上升趨勢，這嚴(yán)重影響了夫妻感情和家庭和睦及社會的和諧發(fā)展。而輔助生殖技術(shù)(assisted reproductive technology，ART)的出現(xiàn)，為臨床治療不孕癥提供了新方案，為不孕癥患者帶來了新的希望。體外受精-胚胎移植技術(shù)（in vitro fertilization-embryo transfer，IVF

2、-ET）作為ART的一項(xiàng)重要治療措施，其體外受精率雖然很高，可達(dá)90％，但其臨床妊娠率卻一直徘徊在較低水平，僅30％-60％，遠(yuǎn)不能夠滿足廣大患者的需求。影響人類成功妊娠的主要因素有:子宮內(nèi)膜厚度、胚胎質(zhì)量、子宮內(nèi)膜對胚胎的接受性和子宮內(nèi)膜的微環(huán)境，而子宮內(nèi)膜厚度是關(guān)系到子宮內(nèi)膜對胚胎接受能力和維持胚胎繼續(xù)生長發(fā)育的關(guān)鍵因素。近年來對增加子宮內(nèi)膜厚度的方法主要有，子宮內(nèi)膜輕創(chuàng)術(shù)和藥物治療。子宮內(nèi)膜輕創(chuàng)術(shù)對醫(yī)生的操作技術(shù)要求比較高，選擇刺

3、激時機(jī)也比較嚴(yán)格，對于臨床經(jīng)驗(yàn)不豐富的醫(yī)生不宜實(shí)施，藥物治療有生長激素、雌激素、阿司匹林和中藥方劑，雖然都取得一定療效，但生長激素，價(jià)格比較昂貴，增加患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān);雌激素和阿司匹林的安全性尚存在眾多質(zhì)疑;中藥方劑煎制較麻煩，服用不方便，患者依從性差，從而達(dá)不到較好的治療效果。而坤泰膠囊是一種純中藥制劑，服用方便，并有臨床研究顯示，其不僅可以改善患者的卵巢功能，還可以增加不孕癥患者的子宮內(nèi)膜厚度。但坤泰膠囊的作用機(jī)制尚不完全明了。

4、>　　本研究的目的是通過觀察坤泰膠囊對控制性超排卵和超排卵小鼠增殖期子宮內(nèi)膜厚度、組織形態(tài)學(xué)的影響以及對表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)、胰島素樣生長因子-Ⅰ(insulim-like growth factor-Ⅰ，IGF-Ⅰ)、增殖細(xì)胞核抗原(proliferrating cell nuclear antigenting，PCNA)和白血病抑制因子(leukaemia inhibitory fa

5、ctor，LIF)表達(dá)的影響，分析其對子宮內(nèi)膜的作用和作用機(jī)制，為坤泰膠囊用于臨床提高妊娠率提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　材料與方法：
　　選擇清潔級健康昆明未孕雌性小白鼠為實(shí)驗(yàn)研究對象，飼養(yǎng)條件室內(nèi)濕度為60％～70％，室內(nèi)溫度為18℃～20℃，12小時暗室，12小時光照，自由攝食，飲水，觀察小白鼠的動情周期，選擇動情周期連續(xù)正常的小白鼠，隨機(jī)分為7組，每組各15只，即為對照組（A組），超排卵組（B組），超排卵+常規(guī)劑量坤泰膠囊組[

6、灌服坤泰膠囊90.1mg/100g體重(B1組)]，超排卵+大劑量坤泰膠囊組[常規(guī)劑量2倍(B2組)]，控制性超排卵(COH)組（C組），COH+常規(guī)劑量坤泰膠囊組[灌服坤泰膠囊90.1mg/100g體重（C1組）]，COH+大劑量坤泰膠囊組[常規(guī)劑量2倍（C2組）]。依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，建立實(shí)驗(yàn)動物模型。超排卵組及超排卵組+常規(guī)劑量坤泰膠囊組、超排卵+大劑量坤泰膠囊組，每只小鼠每天上午9時腹腔注射等體積生理鹽水，連續(xù)9天，至第9天9時加注射

7、PMSG10IU/只，COH組及COH+常規(guī)劑量坤泰膠囊組、COH+大劑量坤泰膠囊組于小鼠動情后期開始，每只小鼠每天上午9點(diǎn)腹腔注射GnRHa1.5μg/100g體重，連續(xù)9天，至第9天9時，每只小鼠加注PMSG10IU。
　　對照組于小鼠動情前期頸椎脫臼處死，超排卵組、超排卵+常規(guī)劑量坤泰膠囊組、超排卵+大劑量坤泰膠囊組、COH組、COH+常規(guī)劑量坤泰膠囊組、COH+大劑量坤泰膠囊組，均于小鼠注射PMSG48小時后頸椎脫臼處死，

8、開腹取出子宮，進(jìn)行固定及指標(biāo)檢測。小鼠子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的觀察采用HE染色，小鼠子宮內(nèi)膜厚度的測量使用多功能圖像分析儀，檢測小鼠子宮內(nèi)膜中EGF、IGF-Ⅰ、PCNA以及LIF蛋白的表達(dá)定位及進(jìn)行半定量分析采用免疫組化SP法，所有數(shù)據(jù)利用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0進(jìn)行分析，定量資料采用t檢驗(yàn)和t'檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1、加坤泰膠囊組小鼠子宮內(nèi)膜厚度顯著厚于未加坤泰膠囊組小鼠子宮內(nèi)

9、膜厚度(P＜0.01)，且小鼠子宮內(nèi)膜間質(zhì)較疏松、腺體數(shù)目較多、腺腔較大，分布均勻。
　　2、LIF蛋白及EGF蛋白主要表達(dá)于小鼠子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞及腺上皮細(xì)胞的胞漿中，少量表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞胞漿中。IGF-Ⅰ蛋白主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞的胞漿中，中等量表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞胞漿中。PCNA蛋白主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞的胞核中，少量表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞胞核中。
　　3、EGF、IGF-Ⅰ、PCNA以及LIF蛋白

10、在超排卵組、COH組小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)均顯著低于對照組(P＜0.01)，且超排卵組顯著低于COH組(P＜0.01)。
　　4、EGF、IGF-Ⅰ、PCNA以及LIF蛋白在超排卵組和COH組小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)均分別顯著低于加常規(guī)劑量坤泰膠囊組和加大劑量坤泰膠囊組(P＜0.01)。
　　5、EGF、IGF-Ⅰ、PCNA以及LIF蛋白在加常規(guī)劑量坤泰膠囊組小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)仍顯著低于對照組和加大劑量坤泰膠囊組(P＜0.01)。<

11、br>　　6、EGF、IGF-Ⅰ、PCNA以及LIF蛋白在對照組小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)與COH+大劑量坤泰膠囊組比較差異無顯著性(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、坤泰膠囊能顯著增加小鼠子宮內(nèi)膜厚度，促進(jìn)小鼠子宮內(nèi)膜生長發(fā)育。
　　2、坤泰膠囊能顯著提高控制性超排卵和超排卵組小鼠子宮內(nèi)膜中EGF、IGF-1、PCNA及LIF蛋白的表達(dá)水平，且加大坤泰膠囊劑量提高更明顯。
　　3、坤泰膠囊可能是通過提高控制性超排