adh2缺失型纖維乙醇工程菌菌株構(gòu)建研究.pdf

1、本文從嗜鞣管囊酵母P-01(Pachysolen tannophilus)出發(fā)，利用wood氏法測定了在發(fā)酵過程中乙醇脫氫酶(ADH Ⅱ)Ⅱ酶活，結(jié)果表明：發(fā)酵過程中P-01的ADH Ⅱ酶活性明顯高于對照菌株南陽酒精酵母1308(Saccharomyces cerevisiae)。 通過對NCBI中存在的Saccharomyceskluyveri、Pichiasnpitisalcohol、CandidaalbicansSC531

2、4、Saccharomyces cerevisiae四個(gè)菌株所具有的乙醇脫氫酶Ⅱ基因(adh2)進(jìn)行同源性分析比對，設(shè)計(jì)同源性引物，克隆嗜鞣管囊酵母P-01的adh2。通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)克隆得到了一段長為340bp的片段，同源性分析表明：其為嗜鞣管囊酵母P-01的adh2部分片段。利用RACE法克隆得到了嗜鞣管囊酵母P-01的adh2。并向NCBI注冊了序列，序列號分別為EU570211，EU590042。 采用基因敲

3、除技術(shù)定向敲除嗜鞣管囊酵母P-01的adh2，重組子通過PCR、全糖發(fā)酵等試驗(yàn)進(jìn)行篩選，最后得到兩株能夠同時(shí)發(fā)酵木糖和葡萄糖、比較優(yōu)良、adh2缺失的菌株MC和ND。發(fā)酵結(jié)束時(shí)乙醇度分別達(dá)到2.0％(v/v)、2.4％(v/v)，原菌P-011.85％(v/v)，ND、MC發(fā)酵產(chǎn)乙醇性能比P.0提高了5.2％和19.4％，乙醇產(chǎn)率達(dá)到理論值的74.5％和85.1％。 最后對重組子ND、MC在玉米秸稈水解液中的發(fā)酵性能進(jìn)行了研究。