OCT4B1誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化而獲得干細胞特性的機制研究.pdf

1、目的：
　　在前期研究中已證實OCT4B1誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細胞發(fā)生EMT而獲得干細胞特性，本研究探討其調(diào)控機制。
　　方法：
　　在前期研究中已證實，通過懸浮培養(yǎng)的人結(jié)直腸癌腫瘤干細胞（SW480 CSCs）OCT4B1 mRNA水平較其親本細胞（SW480）明顯增高；采用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)沉默SW480 CSCs中OCT4B1基因（SW480 CSCs-RNAi）后，與陰性對照組（SW480 CSCs-NC）比較

2、，OCT4B1 mRNA水平明顯降低，本研究對上述四組細胞作如下檢測：
　?。?）用RT-qPCR法及Western blot檢測調(diào)控腫瘤EMT過程的指標PLK1 mRNA及蛋白水平是否與OCT4B1呈相同趨勢變化；
　?。?）行miRNA芯片檢測，篩選與OCT4B1及PLK1變化趨勢相反，且與PLK1存在結(jié)合位點的miRNA；
　?。?）用RT-qPCR方法驗證該miRNA在四組細胞中的表達是否與芯片檢測結(jié)果一致；<

3、br>　?。?）采用雙熒光素酶實驗檢測篩選的miRNA與PLK1是否存在直接調(diào)控作用。
　　結(jié)果：
　?。?）RT-qPCR檢測四組細胞PLK1 mRNA表達，SW480與SW480 CSCs相對水平分別為(1.00±0.13)及(3.22±0.10)，SW480 CSCs-NC與SW480 CSCs-RNAi相對水平分別為(1.99±0.17)及(0.92±0.09)，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；Western

4、blot檢測PLK1蛋白表達，SW480與SW480 CSCs蛋白表達分別為（0.68±0.05）與（1.16±0.08），SW480 CSCs-NC與SW480 CSCs-RNAi蛋白表達分別為（1.50±0.11）與（0.27±0.06），差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），提示PLK1與OCT4B1呈相同趨勢變化；
　　（2）miRNA芯片檢測發(fā)現(xiàn)miR-8064與OCT4B1及PLK1變化趨勢相反，通過生物信息學軟件Ta

5、rgetScan human分析發(fā)現(xiàn)它與PLK1存在結(jié)合位點；
　?。?）進一步通過RT-qPCR證實miR-8064在四組細胞中表達，SW480與SW480 CSCs相對水平分別為(1.00±0.12)及(0.40±0.06)，SW480 CSCs-NC與SW480 CSCs-RNAi相對水平分別為(0.12±0.03)及(0.93±0.02)，均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），發(fā)現(xiàn)在四組細胞中miR-8064表達與芯片檢測結(jié)果