粟酒裂殖酵母核糖體蛋白R(shí)PL32表達(dá)水平下降引發(fā)的無性絮凝作用及與有性絮凝作用的比較研究.pdf

1、我們實(shí)驗(yàn)室之前報(bào)道過粟酒裂殖酵母核糖體蛋白R(shí)PL32-2具有潛在的轉(zhuǎn)錄因子活性。在進(jìn)一步研究RPL32-2功能時(shí)，發(fā)現(xiàn)RPL32蛋白基因敲除突變體rpl32-I△突變株和rpl32-2△突變株在營養(yǎng)豐富的YEPD液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)會(huì)發(fā)生無性細(xì)胞絮凝作用，而基因回補(bǔ)的重組突變菌株rpl32-1△/RPL32-1突變株和rpl32-2A/RPL32-2突變株細(xì)胞絮凝作用消失。隨機(jī)敲除核糖體蛋白rpl21-2、rpl9-2基因的酵母菌株也發(fā)生細(xì)

2、胞凝絮作用，但是隨機(jī)敲除非核糖體蛋白-甘露糖磷酸化甲脒基轉(zhuǎn)移酶的編碼基因mpg、2，6-二磷酸果糖二位磷酸酶的編碼基因fbp的酵母菌株卻沒有發(fā)生細(xì)胞凝絮作用。
　　實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，rpl32-1△突變株和rpl32-2△突變株無性絮凝細(xì)胞內(nèi)總的rpl32(rpl32-1+rpl32-2)表達(dá)水平與未敲除野生型菌株相比分別減少了35.9％和46.9％，合成的核糖體總量較野生型菌株的細(xì)胞分別下降了35.2％和43.0％。在YE

3、PM誘導(dǎo)培養(yǎng)基中產(chǎn)生有性絮凝的YHL6381/SP(h+/h-)細(xì)胞，和在非誘導(dǎo)培養(yǎng)基YEPD中未形成有性絮凝的單倍體細(xì)胞混合物相比，RPL32蛋白的表達(dá)水平在有性絮凝細(xì)胞中也下降了42.1％。
　　轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析表明，有性絮凝細(xì)胞中，很多核糖體蛋白基因和核糖體合成蛋白基因表達(dá)水平下降，而核糖體合成抑制因子的基因表達(dá)水平上升，提示核糖體蛋白下降確實(shí)是有性絮凝作用發(fā)生的一個(gè)特征。另外無性絮凝細(xì)胞和有性絮凝細(xì)胞中都使用了因營養(yǎng)缺乏啟動(dòng)有