鈣與鈣調(diào)素在粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）細(xì)胞周期中的作用.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)室利用一株?duì)I養(yǎng)缺陷型菌株MFP7(h<'->,adel-D25,ade6-M210,S65T-GFP∷caml<'+>,leu1-32,ura4-D18),通過觀察細(xì)胞內(nèi)GFP-CaM的熒光強(qiáng)度以分析胞內(nèi)CaM的濃度及分布變化.該文發(fā)現(xiàn)增加胞外鈣濃度以及低濃度(20~100 μmol/L)三氟拉嗪(TFP)不但能促進(jìn)野生型S.pombe細(xì)胞的增殖,而且對(duì)MFP7菌株也有同樣的效應(yīng),這說明胞外Ca<'2+>和低濃度TFP對(duì)不同遺傳型

2、裂殖酵母細(xì)胞的增殖均有促進(jìn)作用.我們首次采用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察的方法,以Fluo-3負(fù)載S.pombe細(xì)胞,熒光強(qiáng)度反映胞質(zhì)游離Ca<'2+>濃度.該文還對(duì)用1、5、10mmol/L外Ca<'2+>,5mmol/L EGTA,100 μmol/L TFP及缺氮同步化處理的MFP7細(xì)胞內(nèi)GFP-CaM的熒光強(qiáng)度的變化進(jìn)行了觀測(cè).缺氮培養(yǎng)可以將粟酒裂殖酵母細(xì)胞生長(zhǎng)同步化在細(xì)胞周期的G<,1>期,G<,1>期的細(xì)胞為單倍體(DNA含量為

3、1C),細(xì)胞流式法對(duì)細(xì)胞DNA相對(duì)含量的測(cè)定結(jié)果表明在48Channel處,而對(duì)數(shù)期細(xì)胞DNA熒光強(qiáng)度的相對(duì)值分別在48channel和92channel處,細(xì)胞流式法測(cè)定發(fā)現(xiàn)同步化于G1期的細(xì)胞中GFP-CaM的表達(dá)量明顯高于正常生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期細(xì)胞.EGTA處理和同步化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,胞內(nèi)CaM的表達(dá)在G1晚期開始上升到較高的水平.在激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察不同周期時(shí)相裂殖酵母細(xì)胞中CaM的濃度及分布變化,結(jié)果表明,分裂期細(xì)胞總體熒光