粟酒裂殖酵母中Programmed Cell Death 2_C蛋白功能的研究.pdf

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：1、堅(jiān)持以“求實(shí)、創(chuàng)新“的科學(xué)精神從事研究工作。2、本論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。3、本論文中除引文外，所有實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實(shí)的。4、本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。5、其他同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。作者簽名：日期：學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解南京師范大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，學(xué)

2、校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版；有權(quán)將學(xué)位論文用于非贏利目的的少量復(fù)制并允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱；有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索；有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。作者簽名：日期：摘要／Abstract摘要』腳舢幽舢舢刪J『『『『JJ『『ff『Jf刪Y17。2lJlt6fIHr16IIIP[10|H|IJ2IIrio‘背景：凋亡是有機(jī)體在漫長(zhǎng)的進(jìn)

3、化過程中發(fā)展起來的細(xì)胞自殺機(jī)制，在清除無用的、多余的或癌變的細(xì)胞，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用。最早對(duì)ProgrammeDCellDeathprotein2(PDCD2)研究發(fā)現(xiàn)該蛋白可能參與細(xì)胞凋亡。但隨著對(duì)其研究的深入，發(fā)現(xiàn)該蛋白似乎與細(xì)胞凋亡無關(guān)，但是和細(xì)胞的發(fā)育，細(xì)胞周期以及某些疾病有一定的聯(lián)系。PDCD2蛋白具有一個(gè)重要的功能結(jié)構(gòu)域一PDCD2_C結(jié)構(gòu)域。將帶有PDCD2一C結(jié)構(gòu)域的蛋白都?xì)w為PDCD2_C蛋白。調(diào)查發(fā)現(xiàn)

4、PDCD2_C蛋白似乎只存在真核生物細(xì)胞中。并且這類蛋白由看家基因編碼，在人和小鼠各個(gè)組織都有表達(dá)。在裂殖酵母中存在兩個(gè)PDCD2一C蛋白：SPACl3G609，PDCD2的同源蛋白本文中命名為pcdl；SPBC25H215，芽殖酵母PDCD2一C蛋白(乃：膨)的同源蛋白本文中命名為pcd20這兩個(gè)蛋白在裂殖酵母中的功能還未有報(bào)道，本文主要探究這兩個(gè)PDCD2蛋白的功能。_C實(shí)驗(yàn)和結(jié)論：1首先用同源重組和隨機(jī)孢子分析法，證明了裂殖酵母中

5、pcdl為必需基因，pod2為非必需基因。這提示這兩個(gè)PDCD2_C蛋白在裂殖酵母中的功能可能不同。接著用高表達(dá)和低表達(dá)的pcdl的質(zhì)粒，都能救活因敲除pcdl致死的單倍體。直接敲除裂殖酵母單倍體pc以敲除菌株能正常生長(zhǎng)。這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)都再次證明pcdl為必需基因，pcd2為非必需基因。2用高表達(dá)和低表達(dá)N端帶2個(gè)FLAG標(biāo)簽pcdl的質(zhì)粒都能救活敲除pcdl的單倍體。但是用高表達(dá)的人PDCD2、芽殖酵母TSR4N端為pcdl，C端為人PD

6、CD2蛋白PDCD2_C結(jié)構(gòu)域的融合蛋白、裂殖酵母pcd2和C端帶5個(gè)FLAG標(biāo)簽pcdl的質(zhì)粒都不能救活敲除了pcdl的單倍體。這些實(shí)驗(yàn)提示：N端2個(gè)FLAG標(biāo)簽對(duì)pc棚的定位和功能沒有太大影響；人和芽殖酵母的PDCD2一C蛋白與裂殖酵母pc以功能不同，也有可能在裂殖酵母中pcdl還有其他必需功能；人PDCD2_C結(jié)構(gòu)域也不能替代裂殖酵母PDCD2_C結(jié)構(gòu)域，可能因?yàn)槿薖DCD2一C結(jié)構(gòu)域替代裂殖酵母的結(jié)構(gòu)域后整個(gè)蛋白的空間結(jié)構(gòu)遭到破

7、壞，導(dǎo)致蛋白功能喪失；pcdl和pcd2功能不同；C端的5個(gè)FLAG能破壞pcdl的空間結(jié)構(gòu)導(dǎo)致蛋白功能喪失或者5個(gè)FLAG阻礙了pc棚與其相互作用蛋白的結(jié)合。3敲除pcd2的單倍體在面對(duì)逆境壓力時(shí)，生長(zhǎng)狀態(tài)和野生型幾乎一致。這表示pcd2在裂殖酵母的應(yīng)對(duì)逆境過程中沒有必需的作用。4利用酵母雙雜交系統(tǒng)中的篩選，與pcdl和pcd2相互作用的蛋白。發(fā)現(xiàn)moel和40S蛋白rps2602片段可能和pcdl相互作用。而SPACl09305(A