粟酒裂殖酵母Ppr10蛋白的定位及對(duì)線粒體蛋白影響的研究.pdf

1、線粒體是真核生物中非常重要的細(xì)胞器之一，它參與ATP的合成以及物質(zhì)代謝、細(xì)胞凋亡等多種生理過(guò)程。裂殖酵母(S.pombe)作為一個(gè)簡(jiǎn)單的真核生物的研究模型，在線粒體的轉(zhuǎn)錄和翻譯研究中應(yīng)用廣泛，作為線粒體的研究模型，裂殖酵母的優(yōu)勢(shì)也越來(lái)越被關(guān)注。
　　線粒體基因組的轉(zhuǎn)錄過(guò)程是先形成多順?lè)醋?，再進(jìn)行剪切加工，形成成熟的RNA。在多種生物當(dāng)中，PPR蛋白參與到了線粒體基因組的轉(zhuǎn)錄和翻譯的過(guò)程。PPR蛋白是指含有兩個(gè)及以上串聯(lián)重復(fù)的PPR

2、模體的蛋白質(zhì)，而PPR模體則是由35個(gè)氨基酸殘基組成的結(jié)構(gòu)域。PPR蛋白對(duì)單鏈的RNA具有序列特異性識(shí)別模式，與RNA的轉(zhuǎn)錄、編輯、剪切和穩(wěn)定等過(guò)程都密切相關(guān)。粟酒裂殖酵母的線粒體基因組編碼25種tRNA、8種mRNA、2種rRNA和一個(gè)mpB。
　　在本文中研究了一個(gè)PPR蛋白在線粒體中發(fā)揮的作用。Ppr10蛋白是一個(gè)最近被發(fā)現(xiàn)的PPR蛋白，通過(guò)構(gòu)建ppr10的敲除菌，發(fā)現(xiàn)它在富集培養(yǎng)基上生長(zhǎng)受到了一定的影響，而當(dāng)在富集培養(yǎng)基中

3、加入抗霉素A時(shí)，△ppr10菌株的生長(zhǎng)受到了劇烈的抑制。這就意味著ppr10基因與線粒體的功能密切相關(guān)。通過(guò)一系列的研究發(fā)現(xiàn)，首先，Ppr10蛋白定位于線粒體中，且位于線粒體內(nèi)部，是一個(gè)可溶性蛋白。PPR蛋白是一類(lèi)與RNA結(jié)合而發(fā)揮作用的蛋白，它主要參與線粒體基因組的轉(zhuǎn)錄和翻譯，根據(jù)PPR蛋白的這一特征，覺(jué)得Ppr10蛋白更可能是一個(gè)線粒體基質(zhì)蛋白。其次，Ppr10蛋白功能的缺失影響了線粒體基因組編碼的蛋白的合成。通過(guò)體內(nèi)標(biāo)記線粒體基因

4、組蛋白的實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)，除了Cob1蛋白外，其他線粒體基因編碼的蛋白的合成水平出現(xiàn)了不同程度的降低，尤其是Cox1、Cox2和Atp8，9這幾個(gè)蛋白。免疫印記分析實(shí)驗(yàn)告訴我們，當(dāng)ppr10基因缺失后，線粒體蛋白Cox1、Cox2、Cox3、Cob1的水平劇烈下降。幾乎檢測(cè)不到。既然ppr10基因敲除之后影響了線粒體基因組編碼的蛋白的合成，同時(shí)也使得蛋白Cob1變得極不穩(wěn)定。那么對(duì)于核基因組編碼的參與構(gòu)成復(fù)合體IV的蛋白Cox4，是不是也受