eIF2α磷酸化及ATF6參與苯并(a)芘-7，8-二氫二醇-9，10-環(huán)氧化物誘發(fā)的細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng).pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文eIF2α磷酸化及ATF6參與苯并（a）芘7，8二氫二醇9，10環(huán)氧化物誘發(fā)的細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)姓名：王巧玲申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：邵吉民20091201浙江大學(xué)碩上學(xué)位論文中文摘要為更加深入地了解細(xì)胞如何通過識別和處理BPDE引起的應(yīng)激信號發(fā)揮效應(yīng)，我們集中研究了BPDE暴露細(xì)胞中CREB／ATF家族轉(zhuǎn)錄因子ATF6和ATF4、以及在ATF4上游發(fā)揮重要作用的真核翻譯啟動因子20【亞單位

2、(aunitofeukaryoticInitiationFactor2，elF2a)的表達(dá)、激活情況及其生物學(xué)意義。elF2彬ATF4信號通路在細(xì)胞識別和處理應(yīng)激信號過程中發(fā)揮重要作用。目前發(fā)現(xiàn)哺乳動物細(xì)胞中存在四種elF2a磷酸激酶，即HRI(haemregulatedinhibitorkinase)、PKR(proteinkinaseRNA—dependent)、PERK(PKR—likeendoplasmicreticulum(E

3、R)kinase)和GCN2(generalcontrolnonderepressible2)。每種激酶具有自己獨(dú)特的調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域，接受不同應(yīng)激信號的調(diào)節(jié)。elF2a在蛋白質(zhì)翻譯起始過程中發(fā)揮著重要的作用。elF2a的磷酸化可以引起整體蛋白的翻譯減少，從而減少應(yīng)激狀態(tài)下細(xì)胞承受的壓力；同時，elF2a磷酸化也會選擇性地激活某些蛋白的翻譯，如ATF4和ATF5等。ATF4表達(dá)上升又可以激活其他一些轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，如ATF3、CHOP(CCAA

4、T／enhancerbindingproteinhomologousprotein／GADD153(growtharrestandDNAdamage—inducibleprotein153))等。這些轉(zhuǎn)錄因子可以激活一系列在調(diào)節(jié)細(xì)胞損傷修復(fù)和凋亡等過程中發(fā)揮重要作用的基因。ATF6(包括ATF6a和p)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)(ERstress)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子。它的激活依賴于其從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)到高爾基體，并被位點(diǎn)1蛋白酶(S1P)和位點(diǎn)2蛋白酶(S2

5、P)切割產(chǎn)生有活性的N端片段，進(jìn)而促進(jìn)分子伴侶和蛋白折疊酶的表達(dá)，發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。ATF6a和ATF61B的序列具有高度的同源性，并且在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時都可以被剪切。研究報道兩者可能發(fā)揮著相似的作用，但也有研究報道ATF613的轉(zhuǎn)錄活性較低，可能作為ATF6a的抑制因子存在，因此本文中對ATF6的研究主要集中在ATF6a上。我們用不同濃度BPDE(o05，O5，1和2“M)處理人羊膜FL上皮細(xì)胞，經(jīng)不同時間培養(yǎng)后，收集全細(xì)胞裂解液，采用聚