牛奶子果實(shí)成熟過(guò)程上調(diào)蛋白表達(dá)譜及IPI基因全長(zhǎng)的克隆與分析.pdf

1、牛奶子(Elaeagnus umbellata Thunb.)果實(shí)富含人體所需多種氨基酸、礦質(zhì)元素、維生素、必需脂肪酸、類黃酮、番茄紅素等物質(zhì),是一種極具開發(fā)潛力的天然抗氧化劑和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。它不僅可作為水果直接食用,而且其提取物更具抗癌等藥用價(jià)值,同時(shí)還有可能成為番茄的替代品用于工廠化生產(chǎn)番茄紅素,綜合開發(fā)利用前景廣泛。
　　 由于牛奶子是野生植物,對(duì)其果實(shí)的生長(zhǎng)發(fā)育尚不了解。為此,我們以Bio-Rad高通量雙向電泳系統(tǒng)為技術(shù)平

2、臺(tái),通過(guò)改進(jìn)和優(yōu)化牛奶子果實(shí)蛋白的提取方法及電泳條件,首次建立了一套適合牛奶子果實(shí)總蛋白的高分辨率和重復(fù)性好的雙向電泳體系,用以研究牛奶子果實(shí)成熟過(guò)程蛋白組變化,結(jié)合相關(guān)有機(jī)物的測(cè)定,來(lái)探討果實(shí)成熟的分子機(jī)制。此后,我們從上調(diào)蛋白中選擇了一個(gè)萜類物質(zhì)合成的關(guān)鍵酶--異戊烯焦磷酸異構(gòu)酶(IPI),克隆得到了基因全長(zhǎng)。結(jié)果如下:
　　 1.用酚法提取蛋白時(shí),適當(dāng)延長(zhǎng)第2次平衡時(shí)間,并及時(shí)更換平衡緩沖液Ⅱ,可獲得高分辨率的總蛋白圖譜。

3、這種改良了的方法解決了牛奶子果實(shí)中富含的色素和多酚等次生代謝物對(duì)雙向電泳(2-DE)的干擾問(wèn)題,重復(fù)性好,適用于果實(shí)中蛋白的2-DE分析和爾后的技術(shù)操作。
　　 2.果實(shí)成熟是一個(gè)復(fù)雜的生理生化過(guò)程,包括糖類合成、有機(jī)酸代謝和類胡蘿卜素積累等。在成熟的牛奶子果實(shí)中,葡萄糖和果糖為主要糖存在形式；蘋果酸為最豐富的有機(jī)酸；番茄紅素含量高達(dá)2345μg/g干重,相當(dāng)于傳統(tǒng)番茄的17倍。利用2-DE技術(shù)篩選出63個(gè)上調(diào)表達(dá)蛋白,采用串聯(lián)