分級酶解和洗脫在大鼠海馬細胞膜蛋白質(zhì)組學研究中的整合應(yīng)用.pdf

1、近年來蛋白質(zhì)組學已被廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學的研究，通過這種研究可獲得諸如蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用及翻譯后修飾等信息。海馬是大腦皮層以下的一個特殊結(jié)構(gòu)，它對來自不同感覺器官的信息進行整合，并在動物的學習和記憶中起著非常重要的作用。膜蛋白在海馬細胞中扮演著重要的角色，如信號傳遞、物質(zhì)轉(zhuǎn)運、細胞識別、細胞運動、細胞免疫和代謝調(diào)控等。對膜蛋白的研究將會促進海馬發(fā)生發(fā)展機制的理解，以及相關(guān)疾病的診斷和治療。 本文以大鼠海馬細胞為材料，勻漿后

2、經(jīng)過蔗糖密度梯度離心，收集37-41％之間的膜樣品為研究對象，綜合利用分級酶解與洗脫的方法進行了膜蛋白質(zhì)組學分析。首先用胰蛋白酶直接在膜上預(yù)酶解，離心收集酶解釋放的肽段，肽段經(jīng)過反相色譜分級分離后進行CapLC-MS/MS質(zhì)譜分析，共鑒定到525個非冗余蛋白質(zhì)，其中膜蛋白占31.18％，整合膜蛋白(IMP)占10.84％。為了洗脫吸附在膜片上的肽段，又用兩種不同的洗脫方法即常規(guī)洗脫和分級洗脫，用得到的肽段分別鑒定到133個和233個非冗

3、余蛋白質(zhì)，表明分級洗脫能夠更充分地洗脫吸附肽段。經(jīng)過分級洗脫的膜片繼續(xù)用于脫氧膽酸鈉(SDC)輔助的膜上酶解，離心收集的肽段經(jīng)鑒定，共得到149個非冗余蛋白質(zhì)，其中膜蛋白占57.7％，IMP占23.5％。最后，對殘留膜片進行管膠酶解，并成功鑒定到83個非冗余蛋白質(zhì)，61.45％是膜蛋白，31.33％是IMP。通過分級酶解與洗脫所鑒定的蛋白質(zhì)經(jīng)過嚴格地去冗余后，共鑒定到712個非冗余蛋白質(zhì)，其中包括很多受體蛋白質(zhì)、轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)、通信蛋白質(zhì)、