Versican影響胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤預(yù)后的作用機(jī)制及晚期進(jìn)展性胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤的臨床資料分析.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了論述：
　　第一部分 Versican在胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤中的表達(dá)水平和臨床意義
　　胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤（pancreatic neuroendocrine tumor, pNET）為罕見腫瘤，但其發(fā)病率逐年上升，相同分期的pNET患者預(yù)后差異很大。因此尋找與預(yù)后相關(guān)的特異性分子標(biāo)志物，指導(dǎo)臨床治療和判斷預(yù)后是目前pNET研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。Versican(VCAN)是一種大分子硫酸軟骨素蛋白多糖，我們前期

2、的蛋白質(zhì)芯片研究結(jié)果顯示Versican在pNET腫瘤組織中表達(dá)陽性率高。
　　目的：
　　本研究擬擴(kuò)大樣本量檢測Versican在pNET組織中的表達(dá)水平，回顧性分析Versican與pNET患者臨床預(yù)后的關(guān)系。
　　方法：
　　回顧性收集2005至2010年間的127例pNET患者的完整臨床病理資料及隨訪結(jié)果。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測腫瘤組織及瘤旁組織中的Versican蛋白表達(dá)水平，探討pNET腫瘤組織與瘤

3、旁組織間Versican蛋白表達(dá)陽性率有無差異;結(jié)合患者信息，分析pNET腫瘤組織中Versican表達(dá)陽性率與pNET患者的臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　127例pNET腫瘤組織及46例瘤旁組織Versican免疫組化染色結(jié)果顯示，46例瘤旁組織中的胰島細(xì)胞表達(dá)均為陽性;腫瘤組織中52例表達(dá)陰性(40.9％)，75例表達(dá)陽性(59.1％)。腫瘤小于2cm、腫瘤分期Ⅰ-Ⅱ期及胰島素瘤的pNET患者中Versi

4、can的表達(dá)陽性率高于腫瘤大于2cm、分期為Ⅲ-Ⅳ期或非胰島素瘤的患者(p＜0.05)。單因素生存分析顯示腫瘤組織中Versican表達(dá)陽性患者的無病生存期（disease-free survival，DFS）有延長的趨勢，結(jié)果接近有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.08)。亞組分析中，G2患者亞組、N0亞組和F-pNET亞組中，Versican表達(dá)陽性患者的DFS與Versican表達(dá)陰性患者相比有延長的趨勢，結(jié)果接近統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為p=0.05

5、6，p=0.072，p=0.061)。多因素分析顯示腫瘤分期與腫瘤分級(jí)是pNET患者的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　結(jié)論：
　　在腫瘤組織中Versican表達(dá)陽性率與腫瘤大小、腫瘤分期、是否為胰島素瘤存在顯著相關(guān)性;腫瘤組織中Versican陽性表達(dá)與患者預(yù)后可能相關(guān)。
　　第二部分 Versican在胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤細(xì)胞中的作用機(jī)制
　　Versican(VCAN)是一種大分子硫酸軟骨素蛋白多糖，我們前期研究發(fā)現(xiàn)Ver

6、sican在pNET腫瘤組織中表達(dá)陽性率高，并且Versican表達(dá)陽性的pNET患者的無病生存期更長;但Versican在pNET中的作用機(jī)制尚不清楚。
　　目的：
　　本部分進(jìn)一步對Versican在pNET細(xì)胞系中的作用機(jī)制進(jìn)行研究。
　　方法：
　　首先利用定量PCR檢測Versican不同亞型在pNET腫瘤組織和人源pNET細(xì)胞系(BON-1)中的表達(dá)水平;然后設(shè)計(jì)Versican的干擾序列，利用脂質(zhì)體

7、轉(zhuǎn)染法在BON-1中分別轉(zhuǎn)染Versican-siRNA及相應(yīng)對照，采用流式細(xì)胞術(shù)及定量PCR法(qRT-PCR)檢測轉(zhuǎn)染效率。然后檢測Versican干擾后對BON-1細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。利用MTS法檢測各組細(xì)胞增殖;流式細(xì)胞術(shù)分析各組細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡;Transwell小室分析各組細(xì)胞遷移。采用Western blot及qRT-PCR法檢測Versican相關(guān)信號(hào)通路的基因表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　Versican V

8、0亞型在pNET組織及pNET細(xì)胞系中的表達(dá)水平均明顯高于其他三種亞型。在BON-1細(xì)胞系中，Versican干擾組與其對照相比，細(xì)胞的遷移無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05);Versican干擾后BON-1細(xì)胞的增殖率明顯增高，同時(shí)細(xì)胞周期顯示處于G2/M期的細(xì)胞百分比明顯升高(p＜0.05);定量PCR法及Western Blot法發(fā)現(xiàn)Versican干擾后p27的表達(dá)水平較對照組顯著下降(p＜0.05)，而CDK2表達(dá)水平較對照組顯著上

9、升(p＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　本研究發(fā)現(xiàn)VersicanV0亞型是人pNET的主要表達(dá)亞型。Versican表達(dá)下調(diào)可能通過p27/CDK2信號(hào)通路，導(dǎo)致pNET細(xì)胞進(jìn)入G2/M期的細(xì)胞增多，從而促進(jìn)pNET細(xì)胞增殖。
　　第三部分 晚期進(jìn)展的胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤的臨床資料分析
　　藥物治療成為晚期進(jìn)展的胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌瘤(pancreatic neuroendocrinetumor, pNET)的主要治療方式

10、。藥物選擇種類有很多，包括生長抑素類似物、靶向藥物（舒尼替尼、依維莫司）和化療藥物等。但國人晚期pNET患者應(yīng)用各種治療的療效尚無比較數(shù)據(jù)。
　　目的：
　　本研究旨在回顧性分析藥物治療對中國晚期進(jìn)展的pNET患者的臨床療效。
　　方法：
　　收集北京協(xié)和醫(yī)院腫瘤內(nèi)科藥物治療的晚期進(jìn)展的pNET患者的臨床病理資料、方案及生存預(yù)后等信息。使用藥物包括生長抑素類似物(somatostatin analogs，SSA)

11、，靶向藥物（舒尼替尼、依維莫司、索凡替尼）和化療藥物（替莫唑胺、達(dá)卡巴嗪、氟脲嘧啶類）。
　　結(jié)果：
　　共55例pNET患者納入研究。全部患者的5年和10年總生存率分別為75％和62.5％。一線應(yīng)用SSA治療的患者（29例）與應(yīng)用靶向治療患者（15例）的中位PFS(median PFS，mPFS)相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（7個(gè)月和12個(gè)月，p＞0.05）;二線應(yīng)用聯(lián)合方案治療的患者（10例）與靶向治療患者（12例）的mPFS相比

12、沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(10個(gè)月和7個(gè)月，p＞0.05)。在SSA治療亞組，Ki-6710-20％患者(10例)的mPFS（5個(gè)月）較Ki-67＜10％患者（19例）的mPFS（9個(gè)月）短，結(jié)果沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.2)。在Ki-6710-20％的患者亞組，應(yīng)用化療患者（9例）的mPFS（12個(gè)月）長于應(yīng)用SSA患者（10例）的mPFS（5個(gè)月），結(jié)果沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.16)。一線應(yīng)用舒尼替尼治療的患者9例，二線及二線以上應(yīng)用舒尼替尼治

13、療的患者9例，兩組的mPFS均為12m，1年-PFS％，ORR和DCR分別為44.4％，22.2％，88.9％和43.7％，33.3％，77.8％，結(jié)果無明顯差異(P＞0.05)。Ki-67＜10％患者應(yīng)用舒尼替尼的mPFS(13m)長于Ki-67＞10％患者(8m)，結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。舒尼替尼的主要不良反應(yīng)為骨髓抑制(14/17，82.4％)、腹瀉(9/17，52.9％)、高血壓(8/17，47.1％)、蛋白尿(6/1