胰島素樣生長因子結合蛋白-6(IGFBP-6)的細胞生長抑制作用及其核定位順序的研究.pdf

1、IGFBP—6是IGF—II的高親和力結合蛋白，對IGF—II活性具有重要的調節(jié)作用。IGFBP—6所具有的抑制IGF—II促腫瘤生長活性的作用已經在很多腫瘤細胞系中得到了證實。隨著研究的深入，IGFBP家族越來越多的生物學活性受到了人們的重視。IGFBP—6在體內廣泛的分布及其與IGF—II的特殊關系表明對其活性的研究具有重要的意義。本論文的研究工作從以下方面對IGFBP—6的功能進行了研究。
　　 首先在原核表達體系中表達了

2、重組人IGFBP—6及其C端，分離純化得到了足夠純度的蛋白產品，檢測了重組人IGFBP—6抑制IGF—II促腫瘤細胞生長的活性，并對IGFBP—6及其C端獨立于IGF的生物學活性做了初步的研究。
　　 1.成功構建了原核表達載體pET—30b—IGFBP—6和pET—30b—IGFBP—6—C，轉化.E.coli感受態(tài)細胞，篩選到了高表達量的菌株，優(yōu)化了表達條件。
　　 2.成功分離純化了可溶性表達的IGFBP—6及其C

3、端，得到純度大于90％的目的蛋白。
　　 3.檢測了IGFBP—6抑制IGF—II促腫瘤細胞A549增殖的活性。
　　 4.檢測了IGFBP—6及其C端單獨也可以抑制PC—3M細胞的生長，證實IGFBP—6具有不依賴IGF—II的生物活性，且進一步明確該作用位點就在其C端。
　　 另外，用本室保存的pEGF—C1—IGFBP—6的質粒瞬時轉染PC—3M細胞，根據(jù)綠色熒光強度在細胞核和細胞漿中的比例，確定了IGFB

4、P—6在細胞核中是有分布的：且構建了pEGFP—C1—BP6—nls和pEGFP—C1—BP6—mut兩個真核轉染質粒，明確了IGFBP—6的核定位相關序列；并通過Annexin V—EGFP和PI雙染凋亡檢測試劑盒檢測了過表達IGFBP—6的PC—3M的凋亡，為進一步研究IGFBP—6的非IGF依賴的生物學活性提供了理論依據(jù)。
　　 通過上述工作，首先在原核表達體系中表達并分離純化到可用于后續(xù)試驗的IGFBP—6及其C端，檢測