2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩47頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、纖維素是地球上分布最廣、蘊藏量最豐富的可再生資源。纖維素的利用與轉(zhuǎn)化對于解決目前世界所面臨的糧食短缺、環(huán)境污染以及能源危機等問題具有十分重要的意義。纖維素酶可以將纖維素水解成為葡萄糖,這是一條無污染且能有效利用纖維素的途徑。但目前纖維素酶的成本仍較高,一些纖維素酶具有活性較低或熱穩(wěn)定性較差等缺點,通過定向進化可以不斷提高并獲得新性能的重組纖維素酶。本試驗以嗜熱子囊菌內(nèi)切葡聚糖酶基因egⅠ為研究對象,通過DNA改組技術(shù)對野生型egⅠ進行突

2、變重組,以期獲得高內(nèi)切葡聚糖酶活性、高穩(wěn)定性的突變菌株。本研究主要結(jié)果:
   ⑴通過優(yōu)化DNaseⅠ酶切時間、無引物PCR和有引物PCR的模板量等關(guān)鍵因素,建立適合于嗜熱子囊菌內(nèi)切葡聚糖酶基因改組的條件。
   ⑵以質(zhì)粒pMD-18T-egⅠ為模板進行PCR擴增,獲得野生型egⅠ,利用DNAshuffling技術(shù),得到大約400個突變克隆,隨機挑選20株進行測序和序列分析,突變率達0.11%~0.43%。
  

3、 ⑶將含有突變基因的重組質(zhì)粒pMD-18T-egⅠ和酵母表達質(zhì)粒pPIC9K用SnaBⅠ、NotⅠ進行雙酶切,經(jīng)T4DNA連接酶連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,抽提質(zhì)粒,獲得攜帶不同片段的質(zhì)粒。線性化后,采用LiCl轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)入畢赤酵母GS115感受態(tài)細胞中,MD平板上篩選Mut+His+轉(zhuǎn)化予。陽性轉(zhuǎn)化子在基礎鹽培養(yǎng)基中誘導表達,經(jīng)酶活測定,篩選出1株活性較高的菌株BY2,酶活為23.75U/mL,比出發(fā)菌株酶活提高了將近10倍。

4、   ⑷為得到高表達基因工程菌株,提取這株突變菌的基因組,以EG-S和EG-A為引物擴增該突變基因,序列分析發(fā)現(xiàn)該突變株為13號突變基因。突變基因與pPIC9K連接,線性化后進行電擊轉(zhuǎn)化。通過活性篩選,得到高活性突變體BY213,在基礎鹽培養(yǎng)基中培養(yǎng)168h后,酶活可達到78.63U/ml,蛋白含量達到1.14mg/mL。表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳分析,分子量為34.1KDa。
   ⑸研究了BY213菌株的內(nèi)切葡聚糖酶酶

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論