干擾素調(diào)控磷脂爬行酶1表達(dá)的分子機(jī)制研究.pdf

1、磷脂爬行酶1(phospholipid scramblase 1，PLSCRl)屬于鈣離子結(jié)合的II型膜蛋白。但是，非棕櫚?；腜LSCRl也可進(jìn)入細(xì)胞核并結(jié)合基因組DNA。本課題組最近的研究表明分化誘導(dǎo)劑全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)和氟波酯(phorbol12-myristate 13-acetate，PMA)通過(guò)活化蛋白激酶C6(protein kinase Cδ，PKCδ)顯著上調(diào)PLS

2、CRl的表達(dá)。另一方面，有報(bào)道顯示干擾素(interferon，IFN)也可增加PLSCRl的表達(dá)和活化PKCδ。但是，有關(guān)IFN和PKCδ上調(diào)PLSCRl表達(dá)的確切機(jī)制尚未闡明。為此，本文試圖以IFNα2a為研究對(duì)象，開(kāi)展PLSCRl的表達(dá)調(diào)控機(jī)制研究，取得如下主要結(jié)果： (1)IFNα2a誘導(dǎo)STATl(Signal transducers and activators oftranscription 1)蛋白的727位

3、絲氨酸磷酸化，并上調(diào)PLSCRl在U937、HTl080等細(xì)胞中的表達(dá)。但是，IFNa2a誘導(dǎo)的PLSCRl表達(dá)并不發(fā)生在來(lái)源于HTl080細(xì)胞，但STATl缺陷的U3A細(xì)胞。在U3A細(xì)胞，野生型STATl的轉(zhuǎn)染表達(dá)完全恢復(fù)IFN．cx2a對(duì)PLSCRl表達(dá)的誘導(dǎo)效應(yīng)，但727位絲氨酸突變型STATl(STATl-S727A)的轉(zhuǎn)染則無(wú)該效應(yīng)。這些實(shí)驗(yàn)表明，IFNa2a通過(guò)STATl上調(diào)PLSCRl的表達(dá)，其中STATl-Ser-727

4、的磷酸化是必需的。 (2)IFNa2a在活化STATl并上調(diào)PLSCRl表達(dá)的同時(shí)，也通過(guò)磷酸化的方式活化PKC-δ。進(jìn)一步地，PKC8抑制劑rottlefin和顯性負(fù)突變型PKC-δ表達(dá)質(zhì)粒(dominant negative PKCδ，DNδ)的轉(zhuǎn)染在抑制PKCδ活性的同時(shí)，也抑制IFN．-αt2a誘導(dǎo)的STATl-Ser-727磷酸化和PLSCRl表達(dá)，說(shuō)明IFN-a2a通過(guò)活化PKC-δ激活STATl信號(hào)通路，進(jìn)而上

5、調(diào)PLSCRl表達(dá)。 (3)為了了解PKC-δ激活STATl信號(hào)通路的分子機(jī)制，U937細(xì)胞經(jīng)各種有絲分裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinases，MAPKs)抑制劑包括JNK(c-Jun N-Terminal Kinase)抑制劑SP600125、ERKl／2(extracellular-regulated kinase)抑制劑U0126和P38激酶抑制劑SB203580預(yù)處理。

6、結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SP600125(但不是U0126和SB203580)顯著拮抗IFNa2a引起的STATl絲氨酸磷酸化和PLSCRl上調(diào)。相似的結(jié)果也見(jiàn)于轉(zhuǎn)染表達(dá)顯性負(fù)突變型JNK(DN-JNK)的細(xì)胞。這些實(shí)驗(yàn)表明，JNK介導(dǎo)了IFNa2a誘導(dǎo)的STATl絲氨酸的磷酸化。 (4)特異性JNK抑制劑SB600125和過(guò)表達(dá)DN-JNK質(zhì)粒在抑制JNK活性的同時(shí)，并不影響IFNa2a誘導(dǎo)的PKCδ磷酸化活化。相反，PKCδ抑制劑ro