miR-34a-5p經(jīng)c-Myc及STAG-2通路參與β射線對臍血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷修復(fù).pdf

1、血管穩(wěn)態(tài)對人體健康至關(guān)重要，血管內(nèi)皮損傷導(dǎo)致血管穩(wěn)態(tài)破壞，將會(huì)導(dǎo)致包括冠心病在內(nèi)的多種疾病的發(fā)生。放射性核素可以產(chǎn)生β射線，廣泛用于腫瘤疾病的治療，但其伴隨的副作用不容忽視。我們推測：β射線的副作用與其損傷血管內(nèi)皮，破壞了血管穩(wěn)態(tài)有關(guān)，具體機(jī)制，國內(nèi)外尚未見報(bào)道。因此，建立氚水（HTO）內(nèi)照射模型來探討放射性核素所產(chǎn)生的β射線對血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷及修復(fù)機(jī)制。
　　方法：將HTO加入臍血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）培養(yǎng)基中，連續(xù)培養(yǎng)三天

2、，期間每天用CCK8比色測定法及臺(tái)盼藍(lán)細(xì)胞計(jì)數(shù)法來測定HTO組以及對照組細(xì)胞的增殖能力以及細(xì)胞活力。12小時(shí)內(nèi)分別抽取6個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測HTO組HUVEC細(xì)胞中miR-34a-5p表達(dá)水平。在四個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)，分別對對照組和HTO組的細(xì)胞使用彗星分析法和γ-H2AX免疫熒光染色法來測量DNA單鏈斷裂和DNA雙鏈斷裂情況。通過脂質(zhì)體2000將miR-34a-5p類似物（miR-34a-5p mimics），mi

3、R-34a-5p抑制物(miR-34a-5p inhibitor)以及它們的對照組分別轉(zhuǎn)染進(jìn)入HUVEC細(xì)胞中。將這四組細(xì)胞都暴露于HTO環(huán)境下，連續(xù)培養(yǎng)三天，用同樣的方法來測定每天各組細(xì)胞的增殖能力以及細(xì)胞活力。用同樣的方法測定四個(gè)時(shí)間點(diǎn)（0h，0.5h，2h，4h）上各組細(xì)胞的DNA單鏈斷裂和DNA雙鏈斷裂的情況。最后，我們用RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方法來測定上述六組HUVEC細(xì)胞中c-Myc以及STAG-2基因在0.5

4、h，2h的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：與對照組相比，HTO組HUVEC細(xì)胞增殖能力及細(xì)胞活力在連續(xù)3天測定中均明顯低于對照組。HTO組細(xì)胞中miR-34a-5p的表達(dá)發(fā)生明顯動(dòng)態(tài)變化，根據(jù)miR-34a-5p表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，我們選擇miR-34a-5p表達(dá)最高點(diǎn)、最低點(diǎn)以及急性期的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)來進(jìn)行研究，分別是0h，0.5h，2h以及4h。除了0h以外，其余三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，HTO組HUVEC細(xì)胞DNA單鏈以及雙鏈的損傷相對于對照均明顯增高，且

5、趨勢一致。同樣的，在0.5h、2h、4h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，miR-34a-5p mimics組HUVEC細(xì)胞DNA單鏈以及雙鏈的損傷均高于miR-34a-5p inhibitor組，相反其細(xì)胞增殖能力以及細(xì)胞活力均明顯低于miR-34a-5p inhibitor組。我們觀察到miR-34a-5p mimics組中c-Myc以及STAG-2基因的表達(dá)在0.5h、2h均低于miR-34a-5p inhibitor組。
　　結(jié)論：miR-3