TTR基因Gly83Arg突變致家族遺傳性玻璃體淀粉樣變性小鼠模型基因表達的鑒定.pdf

1、目的：
　　鑒定采用基因打靶技術(shù)的TTR基因Gly83Arg突變小鼠模型是否是研究Gly83Arg家族遺傳性玻璃體淀粉樣變性的穩(wěn)定模型,并確證該突變點是否為該病遺傳學(xué)分子學(xué)特征。
　　方法：
　　飼養(yǎng)SPF級F3代小鼠15只（NEO-；FLP-；TTR+/-），6只雄小鼠，9只雌小鼠。對照組小鼠（C57BL/6）10只。每周腹腔注射一次2.5％水合氯醛(0.1ml/25g)麻醉，采用復(fù)方托吡卡胺滴眼液散瞳，裂隙燈觀察小

2、鼠屈光介質(zhì)，發(fā)現(xiàn)玻璃體渾濁即處死小鼠，送肝臟組織行基因測序；隨機數(shù)字表選實驗組4只與對照組小鼠4只取心臟、腦組織、肝臟、腎臟、眼球做石蠟切片，采用剛果紅染色及偏振光檢測淀粉樣物質(zhì)，免疫組化定位檢測TTR蛋白；研磨肝臟提取RNA與蛋白質(zhì)，熒光定量PCR檢測TTR基因mRNA表達、Western Blot檢測TTR基因蛋白質(zhì)表達。
　　結(jié)果：
　　送檢測序的C57BL/6模型小鼠8只均發(fā)生基因突變，第3外顯子的107位堿基處出現(xiàn)

3、雜合突變，第83氨基酸的密碼子由GGC突變成CGC，即Gly83Arg；剛果紅染色及偏振光檢測TTR突變小鼠玻璃體呈陽性，肝臟、腎臟、心臟、腦組織均呈陰性；免疫組化檢測結(jié)果顯示TTR對照組肝臟呈陽性，玻璃體、腎臟、心臟、腦組織為陰性，模型小鼠玻璃體呈陽性，肝臟、腎臟、心臟、腦組織均為陰性；熒光定量PCR結(jié)果顯示模型小鼠mRNA表達低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.030，P=0.023)；Western Blot檢測模型小鼠肝臟 T