觀察LETM1蛋白在結(jié)腸癌細(xì)胞對化療藥物敏感性的影響機(jī)制及相關(guān)研究.pdf

1、目的：探討奧沙利鉑耐藥細(xì)胞株-HCT116產(chǎn)生的耐藥機(jī)制，觀察LETM1蛋白水平變化對其影響。
　　方法：結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116和奧沙利鉑耐藥細(xì)胞株HCT116-OxR的傳代培養(yǎng)；噻唑藍(lán)（MTT）實(shí)驗(yàn)檢測奧沙利鉑對細(xì)胞存活和死亡情況，并繪制生長曲線，篩選藥物濃度；利用熒光素酶檢測試劑盒檢測細(xì)胞和線粒體內(nèi) ATP的含量；Western-blot法檢測HCT116和HCT116-OxR細(xì)胞中LETM1蛋白和糖酵解相關(guān)蛋白的表達(dá)變化；

2、葡萄糖和乳酸檢測試劑盒檢測兩種細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖和乳酸含量；通過線粒體膜電位檢測試劑盒測定線粒體耗氧量兩種細(xì)胞的耗氧量的相對值。
　　結(jié)果：比較HCT116-OxR和HCT116細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)HCT116-OxR細(xì)胞線粒體耗氧量降低、線粒體 ATP含量減少，而胞漿內(nèi) ATP含量相對增加；（2）比較HCT116-OxR和HCT116細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液葡頭糖含量減少，相反乳酸含量增加；（3）在HCT116-OxR細(xì)胞株內(nèi)HIF-1α、Glu

3、-1、HK-2及LETM1蛋白表達(dá)水平升高，利用3-BrPA抑制糖酵解，則逆轉(zhuǎn)HCT116-OxR細(xì)胞株內(nèi)HIF-1α、Glu-1、HK-2及LETM1蛋白的表；(4)利用3-BrPA抑制糖酵解，增加了HCT116-OxR對奧沙利鉑的敏感性。
　　結(jié)論：1. HCT116-OxR細(xì)胞株通過抑制線粒體功能、增加糖酵解途徑產(chǎn)生ATP，導(dǎo)致對奧沙利鉑的耐藥；2.細(xì)胞漿內(nèi)ATP含量是結(jié)腸癌細(xì)胞引起奧沙利鉑耐藥的關(guān)鍵原因；3.結(jié)腸癌細(xì)胞對化