miR-320靶向FOXM1調控結腸癌化放療敏感性的機制研究.pdf

1、1分類號：密級：UDC：學號：406521612525南昌大學碩士研究生學位論文miR320靶向靶向FOXM1調控結腸癌化放療敏感性的機制研究調控結腸癌化放療敏感性的機制研究miR320enhancesthesensitivityofhumancoloncancercellstochemadiotherapyinvitrobytargetingFOXM1萬璐穎萬璐穎培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學第一附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱：熊建萍教授申

2、請學位的學科門類：臨床醫(yī)學學科專業(yè)名稱：腫瘤學論文答辯日期：2015年6月答辯委員會主席：徐方云評閱人：吳建兵周榮偉2015年6月摘要II摘要摘要目的：目的：探討miR320對人結腸癌細胞生物學行為、5FU和奧沙利鉑化療耐藥及放射線抵抗的影響，并初步闡明miR320逆轉人結腸癌細胞耐藥及放療抵抗的機制。方法：方法：1.選擇miR320相對低表達的HCT116結腸癌細胞及miR320相對高表達的HT29細胞，分別轉染miR320mimic

3、s及miR320inhibit，并各自轉染無義序列NC為對照組。采用實時定量PCR方法檢測結腸癌細胞miR320表達變化。2.采用MTT法、克隆形成試驗檢測轉染后四組結腸癌細胞（HCT116mimics、HCT116NC、HT29inhibit、HT29NC）的增殖能力；采用流式細胞術檢測四組結腸癌細胞凋亡和細胞周期；采用Transwell實驗檢測四組結腸癌細胞遷移及侵襲能力。MTT法檢測5FU和奧沙利鉑對四組細胞的抑制率并計算IC50

4、值。MTT法檢測經放射線處理后的細胞活性。3.采用雙熒光素酶報告基因試驗驗證miR320是否可與FOXM13’UTR靶向結合。RTPCR技術檢測miR320對FOXM1mRNA表達水平的影響。Westernblot技術檢測miR320對FOXM1、βcatenin、CyclinD1、cmyc蛋白表達水平的影響。結果：結果：1.RTPCR結果顯示，轉染后miR320表達水平在HCT116mimics組細胞較HCT116NC組細胞明顯升高；

5、HT29inhibit組則較HT29NC組明顯下降。2.上調miR320明顯抑制HCT116結腸癌細胞增殖及克隆形成能力，抑制細胞周期進展，抑制細胞遷移及侵襲，并增強細胞對5FU、奧沙利鉑及放射線的敏感性，但不影響細胞凋亡率；下調miR320則增強HT29結腸癌細胞增殖及克隆形成能力，促進細胞周期進展，增強細胞遷移及侵襲能力，并降低細胞對5FU、奧沙利鉑及放射線的敏感性，但不影響細胞凋亡率。3.雙熒光素酶報告基因試驗中，共轉染miR32