miR-181a調控谷氨酸-GABA受體在苯丙胺類興奮劑使用障礙中的作用機制研究.pdf

1、背景:
　　谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最重要的興奮性神經(jīng)遞質，其AMPA受體介導興奮性信號快速傳遞。γ-氨基丁酸（GABA），是腦內最重要的抑制性神經(jīng)遞質，其中GABRA1在整個GABA受體中起到最重要的中樞抑制作用。有很多研究表明谷氨酸、GABA受體在阿片類、酒精等成癮物質長期濫用導致的腦功能損傷中起到重要的作用，最終導致使用者產(chǎn)生成癮物質使用障礙，但苯丙胺類中樞興奮劑使用對谷氨酸、GABA受體表達的影響及可能的機制尚未見報道。

2、>　　目的:
　　探討苯丙胺類興奮劑使用對谷氨酸受體基因 GRIA2和 GABA受體基因 GABRA1表達的影響，并尋找異常表達的可能調控機制，為苯丙胺類興奮劑使用障礙預后判斷和治療靶點奠定理論基礎。
　　材料和方法:
　　1.通過ELISA法對苯丙胺類興奮劑使用障礙者外周血谷氨酸受體GRIA2基因及GABA受體GABRA1基因編碼蛋白進行檢測，明確苯丙胺類興奮劑長期慢性使用導致相關受體功能障礙。
　　2.構建甲

3、基苯丙胺暴露神經(jīng)細胞模型，使用逆轉錄和Western blot等方法，檢測甲基苯丙胺暴露后對神經(jīng)細胞谷氨酸受體基因GRIA2和GABA受體基因GABRA1表達的影響。
　　3.通過雙熒光素酶報告基因實驗及Western blot實驗進行miR-181a與GRIA2、GABRA1基因靶向調控關系驗證。
　　4. Sequenom MassARRY質譜基因分析法檢測GABRA1基因12個單核苷酸突變位點，尋找GABRA1基因表達

4、異常的原因。
　　結果:
　　1.苯丙胺類興奮劑使用障礙組GRIA2基因編碼蛋白表達（32.58±10.46）高于健康對照組（23.56±9.68）（p<0.01）。苯丙胺類興奮劑使用障礙組GABRA1基因編碼蛋白表達低于健康對照組（p<0.05）。
　　2.細胞模型結果顯示，甲基苯丙胺升高GRIA2 mRNA和蛋白表達，甲基苯丙胺同樣升高GABRA1 mRNA和蛋白表達。
　　3.熒光素酶報告基因實驗和West

5、ern blot實驗結果表明，miR-181a負向調控GRIA2，GABRA1與miR-181a無負向調控關系。
　　4.正常對照組與苯丙胺類興奮劑使用障礙組在GABRA1基因12個SNP位點等位基因與基因型頻率比較結果顯示，兩組中各位點等位基因與基因型頻率比較未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學差異（p>0.05）。
　　結論:
　　1.苯丙胺類興奮劑使用損害谷氨酸受體GRIA2和GABA受體GABRA1表達。
　　2.苯丙胺類興奮劑