彎曲菌地方分離株毒力相關基因分析及HT-29細胞感染模型的建立與應用.pdf

1、空腸彎曲菌是全球性引起胃腸道感染的主要病原菌之一，并與格林一巴利綜合癥(GBS)及米爾－費歇綜合癥(MFS)等神經系統(tǒng)疾病的發(fā)生關系密切。由于缺乏適當?shù)膶嶒災Ｐ停壳皩漳c彎曲菌的遺傳學特性、毒力因子和致病機理了解甚少。本研究的主要內容是：(1)對我國部分地區(qū)不同來源的空腸彎曲菌和結腸彎曲菌分離株毒力相關基因進行分析；(2)通過建立體外細胞模型，研究空腸彎曲菌分離株的黏附、侵襲和增殖特性，開展空腸彎曲菌的侵襲能力與毒力相關基因間相互關系

2、的初步分析。 一、彎曲菌地方分離株毒力相關基因的分析為了解我國部分地區(qū)彎曲菌分離株中10種毒力基因的攜帶情況，本研究對分離自腹瀉病人、雞、牛和市場流通的453株空腸彎曲菌和40株結腸彎曲菌進行基因檢測和分析。結果表明：結腸彎曲菌分離株各基因的攜帶率均低于空腸彎曲菌。453株空腸彎曲菌中黏附相關基因cadF、pebA、racR平均攜帶率分別為91.39％、95.36％和97.79％，趨化性調節(jié)基因 cheY、docA平均攜帶率分別

3、為95.81％和92.27％，侵襲蛋白基因iamA平均攜帶率為85.87％，鞭毛蛋白基因flaA平均攜帶率為83.66％，而細胞致死性擴張毒素基因cdt、LOS合成相關基因wlaN、質粒基因virB11平均攜帶率僅為72.19％、48.12％和6.57％。同一種基因在不同來源空腸彎曲菌分離株中的分析結果顯示，人源分離株flaA、virB11基因攜帶率較高，牛源分離株 cadF、docA、cheY和iamA基因攜帶率較高，市場分離株peb

4、lA、racR、cdt和wlaN基因攜帶率較高，雞源分離株各基因攜帶率在所有種類分離株中處于中間水平。453株空腸彎曲菌中，86.75％的細菌含有6個以上的毒力相關基因，但由于不同宿主的特異性，不同來源分離株的毒力基因存在較大差異，由此推測，空腸彎曲菌對不同宿主的致病機理可能存在不同。二、空腸彎曲菌分離株HT-29細胞感染模型的建立與應用本研究以人結腸癌細胞系HF-29為材料，建立空腸彎曲菌體外細胞感染模型，用以測定不同來源空腸彎曲菌分

5、離株對HT-29細胞的黏附、侵襲和增殖能力，并對空腸彎曲菌的侵襲能力與毒力基因之間的關系展開初步分析。42株不同來源的空腸彎曲菌分離株黏附、侵襲和增殖實驗顯示：不同細菌對HT-29細胞的吸附、侵襲和增殖能力存在一定差異，其中11株細菌沒有黏附、侵襲和增殖能力、13株細菌沒有侵襲和增殖能力、3株細菌沒有增殖能力、其余15株細菌同時具有黏附、侵襲和增殖能力，且15株細菌對HT-29細胞的平均黏附效率為0.2270％、平均侵襲效率為0.077

6、8％、平均增殖倍數(shù)為12.55倍。 212株腹瀉病人源和雞源空腸彎曲菌分離株的侵襲力實驗表明：54.72％的細菌無侵襲能力，15.09％的細菌侵襲效率在0.0001％-0.01％之間，14.75％的細菌侵襲效率在0.01％-0.1％之間，12.74％的細菌侵襲效率在0.1％-2％之間。腹瀉病人源分離株侵襲HT-29細胞能力顯著高于雞源分離株。 不同侵襲能力分離株毒力相關基因分析顯示：cadF、peblA、docA和fla

7、A基因攜帶率隨著細胞侵襲力的增強而下降，racR、cheY和iamA基因在不同侵襲力菌株間差異不顯著，而virB11、wlaN和cdt等毒素基因攜帶率隨細胞侵襲力的增強而上升。不同侵襲力雞源空腸彎曲菌毒力相關基因與人源空腸彎曲菌相比，cadF、racR、oeblA、cheY，、docA、wlaN和flaA等基因攜帶情況無顯著差異，但iamA、cdt、virB11基因攜帶存在顯著差異，這種差異可能是導致人源分離株HT-29細胞侵襲力高于雞