受體相互作用蛋白3及經(jīng)典程序性壞死信號(hào)通路在腦缺血再灌注損傷中的作用研究.pdf

1、背景:細(xì)胞死亡涉及到生命的多個(gè)環(huán)節(jié)，正面作用有：胚胎的發(fā)育，機(jī)體細(xì)胞的“新陳代謝”，反面左右有：炎癥、腫瘤等。既往認(rèn)為細(xì)胞死亡中除細(xì)胞凋亡是基因預(yù)存的主動(dòng)死亡模式，是由細(xì)胞產(chǎn)生各種信號(hào)分子伴隨能量消耗最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡之外，其他的細(xì)胞死亡都是被動(dòng)的不可逆的細(xì)胞死亡。2005年Degterev等提出一種新的細(xì)胞死亡方式：細(xì)胞程序性壞死。細(xì)胞的這種死亡方式具有壞死樣結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，細(xì)胞膜完整性破壞，周圍組織炎癥反應(yīng)，同時(shí)該過(guò)程受細(xì)胞內(nèi)一系列信號(hào)分子

2、調(diào)控。腦缺血所致腦損傷是我國(guó)神經(jīng)科致死、致殘的主要病因之一。如果能通過(guò)深入探索程序性壞死信號(hào)通路的生物化學(xué)機(jī)制，更進(jìn)一步研究程序性壞死信號(hào)通路在相關(guān)疾病中的參與程度與作用，不但利于對(duì)該信號(hào)通路的認(rèn)知，且對(duì)神經(jīng)內(nèi)外科相關(guān)神經(jīng)缺血再灌注損傷相關(guān)疾病的治療藥物、治療靶向、治療方法起到拓寬、確立的重要作用。
　　目的:本實(shí)驗(yàn)研究體外培養(yǎng)神經(jīng)元細(xì)胞在缺血再灌注損傷后 RIP3的變化規(guī)律。本實(shí)驗(yàn)受臨床上腦梗死后出現(xiàn)缺血半暗帶啟發(fā)，研究并探討程

3、序性壞死在半暗帶區(qū)和梗死區(qū)的分布，進(jìn)一步揭示程序性壞死在腦缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制。
　　方法:原代神經(jīng)元培養(yǎng)，神經(jīng)元細(xì)胞熒光鑒定，RIP3熒光鑒定，傳代細(xì)胞HT22細(xì)胞培養(yǎng)及凍存，細(xì)胞造缺氧模型，動(dòng)物造缺氧再灌注模型，PCR技術(shù)，Western Blotting技術(shù)，MTT技術(shù)，鼠腦TTC染色
　　結(jié)果: RIP3表達(dá)在缺血再灌注在體和體外模型中都有顯著變化。在本實(shí)驗(yàn)所設(shè)之間點(diǎn)中，在缺血再灌注損傷后12小時(shí)RIP3表達(dá)達(dá)

4、到高峰。小鼠海馬來(lái)源細(xì)胞系HT22與大鼠皮層神經(jīng)元造模后PCR結(jié)果趨勢(shì)一致。動(dòng)物造模后梗死區(qū)及半暗帶區(qū)Western Blotting趨勢(shì)一致，與細(xì)胞 PCR趨勢(shì)一致。在體實(shí)驗(yàn)中，梗死區(qū)較半暗帶區(qū)，RIP3表達(dá)波動(dòng)顯著。缺氧時(shí)間1小時(shí)NEC-1實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率較對(duì)照組升高不明顯，而缺氧時(shí)間為4小時(shí)NEC-1實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率較對(duì)照組顯著升高。
　　結(jié)論:腦缺血再灌注模型中，缺血區(qū)和半暗帶區(qū)由于損傷程度不同，程序性壞死參與度不同，梗死