Bt L-7601黑色素的特性分析及其對(duì)Bt制劑的紫外保護(hù).pdf

1、Bt L-7601是一株野生菌株,屬于蘇云金芽孢桿菌松毛蟲亞種(subsp.dendrolimus),其血清型為H4a4b,是從自然界染病的西伯利亞松毛蟲(Dendrolimus sibiricus)中分離得到.它在細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)期中能合成一種棕黑色的色素,并且培養(yǎng)基中不需要添加L-酪氨酸或酪氨酸類似物.色素形成的量,與培養(yǎng)基有關(guān),在LB,NB和發(fā)酵培養(yǎng)基中,色素的最大產(chǎn)量分別為0.223mg/mL、0.257mg/mL和0.227mg

2、/mL.其中,NB培養(yǎng)基中形成的量最高.通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)黑色素和L-7601黑色素所進(jìn)行的一系列的化學(xué)測(cè)定、紫外吸收和紅外吸收分析,確定其為黑色素.Bt L-7601本身有很強(qiáng)的紫外抗性,相比Bt 15A3,其細(xì)胞經(jīng)過(guò)紫外照射10、30和60 min后,其成活率分別為89.6﹪、89.4﹪和25.5﹪,而Bt 15A3僅分別為14.1﹪、5.2﹪和0.4﹪.對(duì)分別加有Bt L-7601黑色素、標(biāo)準(zhǔn)黑色素和沒(méi)有加黑色素的Bt制劑進(jìn)行的紫外線保護(hù)

3、對(duì)比研究證明,Bt L-7601所產(chǎn)黑色素與標(biāo)準(zhǔn)黑色素具有相同的保護(hù)效果.紫外照射5 h后,對(duì)棉鈴蟲進(jìn)行生物測(cè)定,結(jié)果顯示,加有Bt L-7601黑色素和標(biāo)準(zhǔn)黑色素的Bt制劑的殘余毒力基本相同,都是不加黑色素的1.6倍.對(duì)甜菜夜蛾生物測(cè)定顯示,加有Bt L-7601黑色素的Bt制劑的毒力是沒(méi)有加黑色素的12.8倍.同時(shí),保留黑色素和除去黑色素的Bt L-7601發(fā)酵液經(jīng)紫外照射5 h后的生物測(cè)定結(jié)果顯示,Bt L-7601黑色素對(duì)棉鈴蟲

4、和甜菜夜蛾的紫外保護(hù)效果分別為1.5倍和14.4倍.由此證明,Bt L-7601的黑色素對(duì)殺蟲晶體蛋白有很好的紫外保護(hù).經(jīng)紫外照射后,用胰蛋白酶對(duì)保留Bt L-7601黑色素和除去此黑色素的晶體蛋白溶液進(jìn)行處理,通過(guò)SDS-PAGE檢測(cè)發(fā)現(xiàn),沒(méi)有黑色素的晶體蛋白完全溶解,而保留有黑色素的晶體蛋白的蛋白帶和沒(méi)有經(jīng)紫外照射的原液的蛋白帶是一樣的.由此,可以確定,黑色素對(duì)晶體蛋白的保護(hù)作用是明顯的.采用特異引物PCR方法對(duì)Bt L-7601進(jìn)