FTY720與人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞協(xié)同治療內(nèi)毒素所致小鼠急性肺損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:急性肺損傷和急性呼吸窘迫綜合征(acute lung injury/acute respiratory distress syndrome, ALI/ARDS)是臨床危重癥患者高發(fā)病率和死亡率的主要原因，因缺乏有效的治療藥物，所以亟待尋找新的治療手段。近年研究發(fā)現(xiàn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human Umbilical Cord-Mesenchymal Stem Cells, hUC-MSCs)可以有效緩解急性肺損傷和急性呼吸窘迫綜合征

2、，而1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)對(duì)增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能具有重要作用，可抵抗肺臟的炎癥反應(yīng)，減輕肺損傷。FTY720為其類似物，是修飾后化學(xué)合成物，也是S1P1激動(dòng)劑，具有免疫抑制作用，有研究結(jié)果表明，小劑量的S1P1激動(dòng)劑對(duì)于小鼠急性肺損傷有保護(hù)作用。因此我們根據(jù)其各自功能及特點(diǎn)，推測(cè)hUC-MSCs與FTY720之間在治療ALI/ARDS中有協(xié)同性。本實(shí)驗(yàn)研究的目的是探討hUC-MSCs

3、與FTY720治療內(nèi)毒素所致急性肺損傷的協(xié)同作用，以期增加治療效果，并減少各自的治療缺憾，同時(shí)對(duì)其治療機(jī)理進(jìn)行初步研究。
　　方法:將8-10周齡雌性 C57BL/6小鼠隨機(jī)分為5組，分別是正常組、LPS組、hUC-MSCs組、FTY720組、hUC-MSCs與FTY720聯(lián)合給藥組。正常組給予氣管內(nèi)滴注NS，其余各組滴注10 mg/kg內(nèi)毒素制備小鼠急性肺損傷模型，模型建立后24 h，分別給 hUC-MSCs組每只小鼠尾靜脈注射

4、2×105人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，給FTY720組每只小鼠腹腔內(nèi)注射劑量為0.1 mg/kg的 FTY720，聯(lián)合給藥組給予尾靜脈注射2×105人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和腹腔內(nèi)注射劑量為0.1 mg/kg的 FTY720。分別于造模后48 h及7 d處死小鼠，觀察各組肺組織病理變化（HE染色）和病理?yè)p傷評(píng)分、肺組織濕干重比值、肺 Micro-CT(活體)、BALF總蛋白和炎癥因子（IL-12p70、IL-10、 IL-6、MCP-1、IFN-γ、

5、TNF-α）含量在給藥后48小時(shí)和7天分別測(cè)得，48小時(shí)后分析各組小鼠生存率。提取肺總蛋白，進(jìn)行雙向電泳測(cè)定，對(duì)獲取的蛋白圖譜進(jìn)行分析，尋找差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，以觀察用內(nèi)毒素?fù)p傷后肺部蛋白質(zhì)表達(dá)的差異。
　　結(jié)果:1.小鼠肺組織損傷評(píng)分和肺CT結(jié)果表明我們成功建立了內(nèi)毒素誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型。2.研究發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs組、FTY720組、hUC-MSCs與FTY720聯(lián)合給藥組的小鼠給藥后生存率都有所提高、肺病理?yè)p傷評(píng)分降低、

6、濕干重比值降低、灌洗液中總蛋白含量減少以及灌洗液中炎癥因子 IL-6、TNF-α、MCP-1減少。聯(lián)合給藥組與單獨(dú)使用hUC-MSCs或FTY720組相比，聯(lián)合給藥的治療效果最好,但其中生存率和肺濕干重比值的降低并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)果表明急性肺損傷小鼠的肺內(nèi)蛋白量是超過正常小鼠的。蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為(100±2)，其中有21個(gè)表達(dá)的蛋白差異點(diǎn)，通過蛋白質(zhì)譜鑒定和生物信息檢索結(jié)果顯示蛋白質(zhì)過氧化物酶-6在損傷肺和正常肺中有明顯

7、差異。
　　結(jié)論:氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素建立急性肺損傷小鼠模型較穩(wěn)定；使用 hUC-MSCs或FTY720的單獨(dú)給藥組可以減少肺內(nèi)炎癥，hUC-MSCs和 FTY720聯(lián)合給藥組與單獨(dú)給藥相比也可以通過彼此之間的相互作用有效緩解急性肺損傷；蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)果表明急性肺損傷小鼠肺組織中蛋白質(zhì)過氧化物酶-6表達(dá)的增加，機(jī)制還待進(jìn)一步研究。hUC-MSCs和 FTY720聯(lián)合給藥與分別單獨(dú)給藥相比也許是更優(yōu)的治療策略，其機(jī)制還有待于進(jìn)一步探究