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1、腫瘤代謝的特征是有氧糖酵解和活性氧(ROS)增高。腫瘤細(xì)胞常處于高氧化應(yīng)激即高ROS的環(huán)境中,在高ROS的環(huán)境中核酸易發(fā)生突變產(chǎn)生異常堿基,造成遺傳信息的不穩(wěn)定。堿基切除修復(fù)在DNA堿基突變或損傷修復(fù)中扮演重要角色,尿嘧啶DNA糖苷酶(UNG)是完成堿基切除修復(fù)的DNA修復(fù)酶。因此,UNG對(duì)處于高氧化環(huán)境中腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞的生存至關(guān)重要。UNG表達(dá)過(guò)程中具有兩種剪切形式:UNG1和UNG2。UNG1主要表達(dá)于線粒體中,UNG2主要表達(dá)于細(xì)
2、胞核中。已有研究表明UNG1能夠在氧化環(huán)境中與過(guò)氧化物還原蛋白3(PRDX3)相互作用。這表明在高氧化應(yīng)激環(huán)境中尿嘧啶糖苷酶參與了細(xì)胞內(nèi)氧化還原平衡的調(diào)控。因此,對(duì)于肝細(xì)胞癌細(xì)胞這類細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平異常的細(xì)胞,UNG基因?qū)τ谄湔I婵赡馨l(fā)揮關(guān)鍵的作用?;诖?,探索UNG在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及功能對(duì)于了解肝細(xì)胞癌細(xì)胞的抗氧化生存機(jī)制以及尋找新的肝細(xì)胞癌治療靶標(biāo)都具有積極的意義。
本研究首先檢測(cè)了UNG2在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)情況。
3、結(jié)果發(fā)現(xiàn)UNG2在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)明顯高于正常肝組織,并且UNG2在HepG2、Hep3B、7402、Huh7肝細(xì)胞癌細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于正常肝細(xì)胞中的表達(dá)水平。免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)UNG2主要定位于HEK293T細(xì)胞的細(xì)胞核中。同時(shí)UNG2具有特異性的尿嘧啶糖苷酶活性。利用H2O2損傷模型,研究了UNG2對(duì)HepG2肝細(xì)胞癌細(xì)胞抗氧化功能的影響。超氧化物陰離子熒光探針二氫乙啶(dihydroethidium,DHE)染色結(jié)果發(fā)
4、現(xiàn),100μmol/L的H2O2可以顯著提高HepG2細(xì)胞中的ROS水平。碘化丙啶(PI)染色結(jié)果顯示,高濃度H2O2處理引起HepG2細(xì)胞死亡。而過(guò)表達(dá)UNG2可以明顯提高HepG2在H2O2中的活性,同時(shí)過(guò)表達(dá)HepG2細(xì)胞在高濃度H2O2中的死亡比例明顯減少。同時(shí)數(shù)據(jù)顯示UNG2可以調(diào)控P53、Bax、caspase-3和Bcl-2等凋亡相關(guān)基因的表達(dá),并提高HepG2細(xì)胞對(duì)雷帕霉素的敏感性。本研究證明了UNG2對(duì)肝細(xì)胞癌細(xì)胞的抗
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