脂筏特異蛋白對囊泡轉運作用的初步研究.pdf

1、細胞物質轉運實質上是細胞內的一個龐大而復雜的物流系統(tǒng)，這一系統(tǒng)的異常將導致各種相應疾病的發(fā)生。囊泡是這一物流系統(tǒng)中一種可調控的重要的運輸工具，脂筏是膜脂雙層內含有特殊脂質及蛋白質的微區(qū)，它們在這一物流系統(tǒng)中具有重要的作用。本課題引入單分子研究技術和全內反射熒光成像技術，實時動態(tài)的研究了兩類脂筏蛋白與囊泡之間的動態(tài)空間定位關系，并分析了其中一類脂筏蛋白的動力學特征。這一研究有助于我們進一步揭示脂筏的發(fā)生機制；而且對于今后我們進一步認識脂筏

2、功能具有重要的理論及實際指導意義。 本論文首先構建了含熒光標記的caveolin 和flotillin 兩類脂筏特異性蛋白的表達質粒，初步研究了細胞膜脂筏和囊泡轉運的關系。本實驗中我們具體采用全內反射熒光顯微成像技術研究了在小鼠腎上腺嗜鉻瘤細胞系（PC12 ）中caveolin 和NPY 、SNAP25的胞內動態(tài)定位關系和相互作用以及flotillin 和NPY 、SNAP25 的胞內動態(tài)定位關系和相互作用。結果顯示：cave

3、olin 無論是在靜息狀態(tài)還是在高鉀刺激下與NPY 大囊泡或與SNAP25 均沒有明顯的共存現(xiàn)象。同樣flotillin 與NPY 大囊泡和SNAP25 也沒有明顯的共存關系，而且flotillin 自身在TIRFM 下呈一種片狀分布，這說明flotillin 在表達后即分布在細胞膜上。從定位關系上來看，脂筏標記蛋白沒有明顯參與大囊泡轉運的證據(jù)。這與以前人們用化學方法抽提PC12 細胞，發(fā)現(xiàn)構成SNARE 蛋白的SNAP-25 在富含膽