膿毒癥患者血清miRNAs全基因組篩選及對(duì)患者預(yù)后的評(píng)價(jià)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)旨在利用Solexa測(cè)序技術(shù)在全基因范圍內(nèi)篩選可以用來(lái)預(yù)測(cè)膿毒癥預(yù)后的血清miRNAs，并利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)新的miRNAs。
　　 方法：收錄2009年9月15日到2010年11月20日在中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院呼吸重癥監(jiān)護(hù)病房、急診重癥監(jiān)護(hù)病房和外科重癥監(jiān)護(hù)病房住院患者，滿足膿毒癥兩項(xiàng)及兩項(xiàng)以上條件的感染患者94例。按照28天病死率，生存患者51例，死亡患者43例，并以24名健康人血清作為對(duì)照。采集第1天的血清，

2、并記錄對(duì)應(yīng)時(shí)間的生命體征、CRP、PCT、血常規(guī)、生化、凝血及動(dòng)脈血?dú)狻Ｈ缓?，選取生存患者與死亡患者各9例，組成兩個(gè)血清池行solexa測(cè)序分析。利用qRT-PCR驗(yàn)證測(cè)序篩選的差異表達(dá)的miRNAs，對(duì)有差異的miRNAs進(jìn)行ROC曲線分析，比較AUC面積。最后將上述篩選的miRNAs和常用指標(biāo)包括CRP,PCT，APECHE II評(píng)分和SOFA評(píng)分均納入二分類變量logistic回歸分析，篩選同膿毒癥預(yù)后相關(guān)的因素。對(duì)最終篩選的mi

3、RNAs進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)與KEGG通路注釋，預(yù)測(cè)其參與膿毒癥發(fā)病的機(jī)制。另外，利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)新的miRNAs。
　　 結(jié)果：經(jīng)過(guò)Solexa測(cè)序后篩選出12種差異表達(dá)的miRNAs，選取同膿毒癥相關(guān)的6種miRNAs(miR-206,miR-378,miR-223,miR-15b,miR-15a,miR-16)進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證。驗(yàn)證后本研究的主要結(jié)果如下：(1) miR-223，miR-15b和miR-16在兩組之間

4、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p值分別為0.002，0.008和0.009，并且這三種miRNAs的表達(dá)水平生存組高于正常組，死亡組低于正常組；(2)將這三種miRNAs同CRP，PCT，APECHE II評(píng)分和SOFA評(píng)分進(jìn)行ROC曲線分析，比較曲線下面積結(jié)果示miR-16的AUC是0.847(95％CI，0.763-0.932)，高于APECHE II評(píng)分和SOFA評(píng)分的AUC0.813(95%CI，0.721-0.906)，0.807(95%

5、CI，0.712-0.902)。miR-223的AUC是0.768(95%CI，0.661-0.874)高于CRP和PCT的曲線下面積；(3)將這三種miRNAs與膿毒癥患者的性別，年齡，APECHE Il評(píng)分，SOFA評(píng)分，CRP，PCT，白細(xì)胞計(jì)數(shù)，體溫和伴隨疾病（高血壓，糖尿病，冠心病和免疫抑制）納入二分類變量單因素Logistic回歸分析，以p<0.05作為篩選標(biāo)準(zhǔn)，三種miRNAs與APECHE II評(píng)分，SOFA評(píng)分，PCT

6、均入選而納入二分類變量多因素回歸分析，結(jié)果示這三種miRNAs與APECHEII評(píng)分，SOFA評(píng)分進(jìn)入最后的回歸方程。miR-223和miR-16的OR分別是0.212(95%CI，0.062-0.734)和0.135(95%CI，0.025-0.727)，說(shuō)明miR-223和miR-16是膿毒癥患者獨(dú)立的保護(hù)因子。APECHE II評(píng)分和SOFA評(píng)分的OR分別是1.212(95%CI，1.046-1.403)和1.518(95%CI，

7、1.083-2.127)，二者是膿毒癥患者預(yù)后的危險(xiǎn)因子；(4)將這六個(gè)miRNAs的表達(dá)水平在正常組，生存組和死亡組之間進(jìn)行one-way ANOVA分析示miR-15b，miR-15a和miR-16在三組間有表達(dá)差異，p值分別是0.023，0.008，和0.017。miR-15a的表達(dá)水平在生存組與死亡組均高于正常組。進(jìn)一步將病例分為正常組(n-24)和膿毒癥組(n=76)進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果示miR-223與miR-15a在兩組間差異

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而miR-15a診斷膿毒癥的AUC是0.853(95%CI，0.768-0.938)，當(dāng)miR-15a的表達(dá)水平是0.034時(shí)，miR-15a診斷膿毒癥的特異性是75.0%，敏感性是86.8%。這些數(shù)據(jù)顯示miR-15a是膿毒癥的新的血清標(biāo)記物。生物信息學(xué)分析顯爾，ACVR2A和MAP2K1是這三種miRNAs預(yù)測(cè)的靶基因。
　　 結(jié)論：
　　 1．miR-223，miR-15b和miR-16可以用來(lái)評(píng)價(jià)膿