豬鏈球菌人源分離株的抗血液殺傷能力與其莢膜合成基因簇變異位點(diǎn)的相關(guān)性研究.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcus suis)是一種重要的人畜共患病病原菌，它能夠引起豬和人的多種疾病，包括敗血癥、腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎，甚至導(dǎo)致死亡。不僅給世界的養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且對(duì)世界公共安全造成了威脅。因?yàn)樨i鏈球菌不僅可以經(jīng)由傷口感染人，還能經(jīng)由胃腸道感染人，所以越來越多的學(xué)者認(rèn)為豬鏈球菌應(yīng)該被評(píng)估為一種新的食源性病原菌。在豬鏈球菌感染人的過程中，血液是一道重要的免疫屏障。在已被報(bào)道的豬鏈球菌的眾多毒力因子中，

2、莢膜是在豬鏈球菌感染過程中第一個(gè)與血液接觸的組分，也是豬鏈球菌抵抗血液中先天免疫的重要毒力因子。豬鏈球菌的莢膜由其基因組上一段成簇排列的基因共同調(diào)控合成，為了探究豬鏈球菌抗血液殺傷的能力與莢膜合成基因簇的相關(guān)性，本課題以歐洲標(biāo)準(zhǔn)菌株P(guān)1/7和2005年四川大爆發(fā)菌株SC19為參考菌株，基于全血?dú)麑?shí)驗(yàn)，從103株豬鏈球菌人源分離株中篩選出了一株抗血液殺傷能力極強(qiáng)的菌株LSM128，并試圖從其莢膜合成基因簇的變異位點(diǎn)中找出導(dǎo)致其抗血液殺傷

3、能力極強(qiáng)的原因。主要結(jié)果如下:
　　(1)通過生物信息學(xué)分析，我們發(fā)現(xiàn)豬鏈球菌人源分離株LSM128的莢膜合成基因簇相比豬鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株P(guān)1/7并未發(fā)生變異。但在其莢膜合成基因簇上游的一個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基因gntR上的第1219個(gè)堿基位點(diǎn)發(fā)生了錯(cuò)義突變，由鳥嘌呤突變?yōu)橄汆堰剩瑢?dǎo)致丙氨酸(Ala)突變?yōu)樘K氨酸(Thr)。
　　(2)以豬鏈球菌P1/7和LSM128作為親本株，通過同源重組，成功構(gòu)建了P1/7和LSM128的gntR基因

4、缺失株和置換株。通過表型實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)gntR并不是調(diào)控莢膜表達(dá)的主要基因。
　　(3)通過對(duì)豬鏈球菌P1/7和LSM128及其gntR基因缺失株和置換株的毒力評(píng)價(jià)，我們發(fā)現(xiàn)gntR與豬鏈球菌的毒力相關(guān)，但在不同菌株中影響程度不同。在P1/7中，缺失gntR基因能夠?qū)е露玖Φ纳险{(diào)，但在LSM128中缺失gntR基因后，毒力的變化卻不顯著。值得注意的是，LSM128的gntR基因上的突變能夠顯著地提高P1/7的抗血液殺傷的能力和毒力