辛伐他汀及氯喹調節(jié)大鼠腦創(chuàng)傷后突觸重建的研究.pdf

1、目的：探索腦創(chuàng)傷后的自噬水平神經突觸再生之間的關系。從本實驗通過應用自噬激動劑辛伐他汀和自噬抑制劑氯喹對腦創(chuàng)傷的大鼠進行干預，檢查藥物對大鼠海馬區(qū)的自噬相關蛋白LC3和Beclin-1的表達水平的影響，以PSD-95和synaptophysin指示突觸密度的高低。研究腦創(chuàng)傷后神經功能回復的機制，為腦創(chuàng)傷后臨床治療提供新的治療靶點。
　　方法：按隨機原則將200只Sprague Dawley雄性大鼠分為4組：1 Sham組（n=50

2、）2 TBI組（n=50）3辛伐他汀組（n=50）4氯喹組（n=50）。每組按手術后時間1d，3d，5d及7d分成四個亞組。使用 Marmarou法，使用高空墜物打擊的方法，建立大鼠彌漫性腦損傷模型。并進行以下各項檢查：1使用HE染色法顯示海馬區(qū)神經元的形態(tài)；2免疫熒光檢測 LC3與 NeuN的表達定位情況；3蛋白質印記法檢測自噬相關蛋白 LC3，Beclin-1和突觸蛋白 PSD-95，synaptophysin的表達水平。450只S

3、D雄性大鼠在創(chuàng)傷后3-9d行Morris水迷宮測試。用q檢驗比較兩組間的數(shù)據(jù)，組間使用單因素方差分析，P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計學意義的界限。
　　結果：1 HE染色結果。sham組：海馬神經元無明顯的病理學改變，神經元清晰，整齊。TBI組：神經元數(shù)目減少，排列稀疏，水腫，細胞周圍間隙和血管周圍間隙較sham組變寬。辛伐他汀組：神經元數(shù)量減少較TBI組輕，輕微水腫，細胞周圍間隙和血管周圍間隙變寬較 TBI組輕。氯喹組：與 TBI

4、組相比沒有明顯區(qū)別。2大鼠的空間學習記憶功能檢測。TBI組在傷后的各組行為學參數(shù)，逃避潛伏期變長，穿越平臺次數(shù)，平臺所在象限路程比及時間比均顯著減少。辛伐他汀組逃避潛伏期較 TBI組變短，穿越平臺次數(shù)，平臺所在象限路程比及時間比均顯著增加。氯喹組逃避潛伏期長于TBI組，穿越平臺次數(shù)，平臺所在象限路程比及時間比均減少。3 LC3 II的Western blot檢測結果。Sham組：只可以檢測到輕微量的蛋白。TBI組：LC3 II的蛋白表達

5、量與 Sham組比較，傷后1d出現(xiàn)明顯升高（P＜0.05），3d達到表達最高點,創(chuàng)傷后7d的表達依然高于Sham組（P＜0.05）。辛伐他汀組：LC3 II表達創(chuàng)傷后1d和3d的表達量明顯高于TBI組，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。氯喹組：LC3 II蛋白表達TBI組相比較，在傷后3d和5d表達較低，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。4 Beclin-1的Western blot檢測結果。Sham組：只可以檢測到輕微量的蛋白，在各時像點無

6、差異。TBI組：Beclin-1的蛋白表達量與Sham組比較，傷后1d出現(xiàn)明顯升高（P＜0.05），3d達到表達最高點，創(chuàng)傷后7d的表達依然高于Sham組（P＜0.05）。辛伐他汀組：Beclin-1表達隨時間變化的趨勢和TBI組類似，在創(chuàng)傷后1d,3d和5d的表達量明顯高于TBI組，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。氯喹組：Beclin-1蛋白表達與時間的對應關系和TBI組類似，與TBI組相比較，在傷后3d表達較低，具有統(tǒng)計學意義（P＜0

7、.05）。5 PSD-95的Western blot檢測結果。Sham組：PSD-95蛋白表十分達明顯，在各時像點無差異。TBI組：PSD-95的蛋白表達量與 Sham組比較明顯降低，之后幾個時間點，PSD-95的表達會有緩慢的上升，但在7d依然明顯低于sham組（P＜0.05）。辛伐他汀組：PSD-95表達隨時間變化的趨勢和TBI組類似，與TBI組相比，5d和7d的差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。氯喹組：PSD-95蛋白表達與 TB

8、I組類似，更為緩慢，在傷后7d表達較低，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。6 synaptophysin的Western blot檢測結果。Sham組：synaptophysin蛋白表達十分明顯，各時像點無差異。TBI組：synaptophysin的蛋白表達量與 Sham組比較明顯降低，之后幾個時間點，synaptophysin的表達會有緩慢的上升，但在7d依然明顯低于sham組（P＜0.05）。辛伐他汀組：synaptophysin表達

9、隨時間變化的趨勢和TBI組類似，與TBI組相比，5d和7d的差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。氯喹組：synaptophysin蛋白表達與時間的對應關系和TBI組類似，與TBI組相比較，在傷后5d和7d較低，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。7 LC3與NeuN的免疫熒光檢測結果。紅色熒光顯示自噬標記蛋白LC3的表達，綠色熒光顯示神經元標記物NeuN的表達。
　　結論：辛伐他汀對大鼠的彌漫性腦創(chuàng)傷有保護作用，可以顯著地提高神經功能的