大鼠創(chuàng)傷后巨噬細(xì)胞TLR2-4的表達(dá)及神經(jīng)內(nèi)分泌激素的調(diào)節(jié).pdf

1、創(chuàng)傷后常發(fā)生免疫抑制，易繼發(fā)感染、膿毒癥，甚至多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)，最終影響結(jié)局。針對(duì)損傷、感染天然免疫很快啟動(dòng)非特異的細(xì)胞、體液反應(yīng)，成為機(jī)體的第一道防線，其在創(chuàng)傷后炎癥反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展動(dòng)態(tài)過(guò)程中具有重要作用。巨噬細(xì)胞是參與天然免疫的重要細(xì)胞，Toll樣受體(Toll-Iike receptor，TLR)家族中的兩個(gè)重要受體TLR2、TLR4主要表達(dá)于

2、巨噬細(xì)胞。近來(lái)發(fā)現(xiàn)TLR4不僅是LPS的模式識(shí)別受體(pattern recognition receptors，PRRs)，還能識(shí)別眾多內(nèi)源性損傷相關(guān)分子模式(damage-associated molecular patterns，DAMPs)，作為感知組織損傷的“哨兵”而介導(dǎo)無(wú)菌性炎癥反應(yīng)。TLR2能識(shí)別較TLR4更多的病原體，也參與了組織損傷后炎癥反應(yīng)。TLR2/4與各自的配體結(jié)合后，通過(guò)相似信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)最終導(dǎo)致NF.KB活化，產(chǎn)生

3、炎癥細(xì)胞因子、趨化因子、共刺激分子等，并被認(rèn)為在機(jī)體防御損傷、感染的天然免疫中具有開(kāi)關(guān)作用。在發(fā)生天然免疫改變的同時(shí)機(jī)體發(fā)生了神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)，表現(xiàn)為交感神經(jīng)系統(tǒng)興奮并伴以不同程度的下丘腦-垂體-腎上腺軸活化，產(chǎn)生腎上腺素(epinephrine，E)、去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)、糖皮質(zhì)激素等，除了能調(diào)節(jié)機(jī)體一般功能外，由于神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)的存在，它們常影響免疫功能，以維持穩(wěn)態(tài)。以往研究顯示，創(chuàng)傷后腹腔、脾巨

4、噬細(xì)胞對(duì)LPS的反應(yīng)性降低，但其機(jī)理不清。TLR2/4是TLR家族兩種主要的受體，其表達(dá)水平與對(duì)配體的敏感性密切相關(guān)。盡管對(duì)其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行了大量研究，但是對(duì)其表達(dá)的調(diào)節(jié)還不清楚。研究TLR2/4在創(chuàng)傷后表達(dá)變化及神經(jīng)內(nèi)分泌激素的調(diào)節(jié)，對(duì)于揭示創(chuàng)傷后免疫功能失常的機(jī)制并預(yù)防、治療相關(guān)并發(fā)癥以提高臨床救治率均具有重要意義。 基于以上認(rèn)識(shí)，本研究采用大鼠創(chuàng)傷模型，以腹腔巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象，進(jìn)行了以下研究：采用RT-PCR動(dòng)態(tài)觀察了創(chuàng)傷

5、后巨噬細(xì)胞TLR2/4 mRNA表達(dá)變化；以不同濃度Pam3CSK4、LPS刺激創(chuàng)傷后24小時(shí)的巨噬細(xì)胞，測(cè)定產(chǎn)生TNF-a水平以反映受體反應(yīng)性；采用HPLC測(cè)定了創(chuàng)傷后24小時(shí)不同時(shí)間點(diǎn)血清E和NE水平的變化，同時(shí)，采用放射免疫法測(cè)定了血清ACTH、皮質(zhì)醇、T3、T4、TSH、β-EP、PRL,觀察了神經(jīng)內(nèi)分泌激素變化規(guī)律；進(jìn)一步進(jìn)行離體實(shí)驗(yàn)，以不同濃度皮質(zhì)酮(corticosterone，CORT)、E、NE刺激巨噬細(xì)胞不同時(shí)間后，

6、以實(shí)時(shí)定量PCR和半定量RT-PCR方法研究了TLR2/4 mRNA表達(dá)；最后，于創(chuàng)傷前行頸交感神經(jīng)干離斷術(shù)(TCST)以觀察其對(duì)創(chuàng)傷后神經(jīng)內(nèi)分泌激素的可能調(diào)節(jié)作用。通過(guò)研究，得出以下結(jié)果： 1.大鼠創(chuàng)傷后巨噬細(xì)胞TLR2/4 mRNA表達(dá)在傷后2小時(shí)后即降低，直至創(chuàng)傷后24小時(shí)。創(chuàng)傷后巨噬細(xì)胞對(duì)Pam3CSK4、LPS刺激后的反應(yīng)性降低。 2.大鼠創(chuàng)傷后2小時(shí)血E、NE水平即明顯升高，ACTH、GC也明顯升高，直至創(chuàng)傷

7、后24小時(shí)。垂體-甲狀腺軸變化表現(xiàn)為創(chuàng)傷后T3、T4均降低，但是TSH變化不顯著。非垂體-腎上腺軸激素β-EP也于創(chuàng)傷后2小時(shí)即升高，PRL于創(chuàng)傷后24小時(shí)升高。 3.CORT刺激巨噬細(xì)胞后能下調(diào)TLR2 mRNA表達(dá)，其作用具有時(shí)間、劑量依賴性，但是對(duì)TLR4 mRNA表達(dá)的影響不明顯。E刺激巨噬細(xì)胞后能下調(diào)TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表達(dá)，其作用也具有時(shí)間、劑量依賴性。不同濃度NE(0～10000ng/ml)刺激巨

8、噬細(xì)胞不同時(shí)間(0～48小時(shí))后不能明顯下調(diào)TLR2/4 mRNA的表達(dá)。 4.TCST不能減輕創(chuàng)傷后2小時(shí)明顯神經(jīng)內(nèi)分泌激素變化，能降低24小時(shí)的血清NE、皮質(zhì)醇水平。 總之，本研究得出以下結(jié)論：1.大鼠創(chuàng)傷后巨噬細(xì)胞TLR2/4 mRNA表達(dá)降低，這對(duì)于防止創(chuàng)傷后機(jī)體過(guò)度炎癥反應(yīng)可能具有一定意義，但與此同時(shí)，也意味著機(jī)體對(duì)病原體(如G+、G'菌)處理能力降低。創(chuàng)傷后巨噬細(xì)胞反應(yīng)性降低，可能與TLR2/4表達(dá)降低有關(guān)。